一站式TA克隆试剂盒

一站式TA克隆试剂盒产品及特点
AT克隆就是利用T载体两个3'端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3'端各 带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过 程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。
本产品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特点：
1. 一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。
2. T载体由XcmI酶切方法制备，两个5'端100%含T突出，自连率几乎为零。 3. 克隆效率高，一次AT克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如BstZI、EcoRI、NotI），便于对克隆 的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备 RNA探针。
8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
一站式TA克隆试剂盒使用及效果
将1 μL载体、1.5 μL对照插入片段、2 μL溶液A、1 μL溶液B混合，加水到10 μL，16℃保温30分钟到过夜，65℃5分钟灭活连接酶。取5 μL转化100 μL感受态 细胞即可。涂盘得到的菌落用于提取质粒DNA，用EcoRI酶切质粒，有1.5K插入片 段的就是重组子。