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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 库存:
大量
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
25次|50次
THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit(第一链耐热
编号:KL4401规格:25次|50次
产品储存:-20℃保存,有效期12个月
制品说明:本制品以RNA 为模板,用THERMOscript Hˉ RTase /RI Mix、2×RT Reaction Mix 高效合成第一链cDNA,操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H 活性缺失的M-MuLV反转录酶THERMOscript Hˉ RTase。同时经过多点突变,提高了反转录温度耐受性,可以在45-55℃进行反转录。野生型的M-MuLV 包含的RNase H 活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA 第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA 杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H 活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,
可用于较长的cDNA 合成以及高比例的全长cDNA 文库的构建等。同时更高的反转录温度大大的提高了GC 含量高,二级结构丰富的RNA 模板的反转录效率。
适用范围:第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。
特点:合成cDNA片段长度最高可达12 kb。
注意事项:
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
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文献和实验Protocol for First-strand cDNA Synthesis
℃for 10 minutes and then at 37℃for 60 minutes.Stop the reaction by heating at 70℃for 10 minutes. Chill on ice.NoteThe synthesized cDNA can be amplified by the PCR (see Protocols for PCR using Taq and Pfu DNA Polymerases) without intermediate phenol
cDNA synthesis using superscript II
: 5x First Strand Buffer 8 µl DDT 4 µl dNTP (10 mM each) 2 µl SUPERase inhibitor 1 µl
Protocol for First-strand cDNA Synth
:ESTs from Phage Plaques 下一篇:cDNA Synthesis from MOLT-4 Cells
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