超低分子量蛋白电泳试剂盒

超低分子量蛋白电泳试剂盒

规格：10次
● 产品组成：组分 名称 规格 贮存 运输
组分1 2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 15 ml 4℃ 常温
组分2 2×多肽电泳分离胶缓冲液 30 ml 4℃ 常温
组分3 2×PAA溶液 超低浓缩胶用 15 ml 4℃ 常温
组分4 2×PAA溶液 超低分离胶用 30 ml 4℃ 常温
组分5 10% APS（干粉） 5 ml 常温 常温
组分6 TEMED 0.5 ml 常温 常温
组分7 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS) 500 ml（干粉） 常温 常温
组分8 2×Tricine 上样缓冲液（含还原剂） 1 ml -20℃ 常温
组分9 FastBlue蛋白染色液 500 ml 常温 常温
● 产品简介：
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全*("套")试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶（8×10cm）。具有以下特点：1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。
4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。
● 贮存和效期：按照标签温度贮存；开封后有效期一年。
● 使用说明：一. 10% APS配制：10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
二. 制胶：I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
表一 （一块1 mm mini胶用量）*
分离胶 浓缩胶
18％T /5 ml 5％T /2 ml
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 / 1 ml
2×多肽电泳分离胶缓冲液 2.5 ml /
2×PAA溶液 超低浓缩胶用 / 1 ml
2×PAA溶液 超低分离胶用 2.5 ml /
10％APS 45-60 μl** 20-30 μl
TEMED 5 μl 2 μl
注： * 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
表二 超低凝胶制备凝固时间表
环境温度 20℃
分离胶配制 浓缩胶配制
分离胶配制量 5 ml -
浓缩胶配制量 - 2 ml
10%APS 50 μl 20 μl
TEMED 5 μl 2 μl
凝固时间 5-10 分钟 20-30 分钟
2．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3．静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3．静置20-30分钟待凝胶聚合
三. 电泳：10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TTS缓冲液。
表三 1×TTS缓冲液配制
1×TTS配制量 500 ml 1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS 50 ml 100 ml
超纯水 450 ml 900 ml
注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。
将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，稳压电泳（表四），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表四 多肽电泳条件
恒电压 150V
起始电流 60-75mA/板胶
结束电流 15-25mA/板胶
电泳时间 2.5-3小时

四. 染色（使用组分9-FastBlue蛋白染色液）：● 用前必读：1 使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。
● 使用方法：1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。
2. 摇床上常温摇动10-15分钟。
3. 观察结果。
● 注意事项：1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2. 常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3. 本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4. 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。