DIGE荧光差异双向凝胶电泳

产品定义

荧光差异双向凝胶电泳（DIGE）是一种在2D电泳之前标记蛋白质样品的方法，可以对样品间蛋白质丰度进行精确分析。

技术原理
Ettan DIGE荧光差异蛋白质表达分析系统在传统双向凝胶电泳技术的基础上，结合多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记（Cy2，Cy3，Cy5）的样品，并且第一次引入内标的概念，极大地提高结果的准确性、可靠性和重复性。在DIGE实验中，每个蛋白质点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白质点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白质丰度变化是真实的。
Ⅰ 荧光染料采用分子量和等电点相互匹配的三种荧光标记分子Cy2、Cy3、Cy5，其特殊设计的NHS脂活性基团通过氨基酸桥连接作用于蛋白质的赖氨酸上，使检测灵敏度达到125pg。
Ⅱ Cy2标记所有样品的等量混合样作为内标，理论上包含了需要分析样品的所有蛋白质点，存在于每一块需要被分析的胶中。采用专业软件对蛋白质点作出更加可观的定量变化分析。
实验流程

注释：“样品及实验预判”包括蛋白质定量、至少一次
双向凝胶电泳实验，对样品质量判断及实验条件优化。
技术优势
相对应传统的双向电泳技术，检测灵敏度更高，大大节约样品；
采用内标对数据进行归一化处理，消除胶与胶之间差异造成的误差，准确度高。
应用领域
疾病标志物筛选 作用机制研究
植物抗逆研究 药物作用靶点研究
特殊功能蛋白质筛选
样品需求

样品类型	样品要求（/组样品）
蛋白质提取物	浓度 > 4μg/μl，蛋白子总量 > 5mg
细胞样品	细胞量 > 108
组织样品	湿重 > 300mg
体液样品	血液体积 > 1ml

技术参考案例
[1] Samuel MA, Tang W, et al. Proteomic analysis of Brassica stigmatic proteins following the self-incompatibility reaction reveals a role for microtubule dynamics during pollen responses. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(12).
[2] De la Cuesta F, Alvarez-Llamas, et al. A proteomic focus on the alterations occurring at the human atherosclerotic coronary intima. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(4).
[3] Hong Y, Peng J, et al. Proteomic analysis of Schistosoma japonicum Schistosomulum proteins that are differentially expressed among hosts differing in their susceptibility to the infection. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(8).