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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
N-EGFP plasmid(with CMV promoter)
- 库存:
690
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
1μg
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)优惠价的品牌:百奥莱博,是优质的克隆与表达产品,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称:N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)优惠价
英文名:N-EGFP plasmid(with CMV promoter)
编号:YT476
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下:
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| EGFP | 677-1393 |
| Multiple cloning site | 1394-1483 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1503-1524 |
| SV40 polyA signal | 1536-1919 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2057-2363 |
| bla promoter | 2388-2512 |
| SV40 promoter | 2532-2870 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 205-3696 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3697-4155 |
| pUC origin | 4284-4951 |
本质粒(5003bp)的图谱如下:
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件:-20℃。
我公司的N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)优惠价,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
·p53抑制剂(Pifithrin-α)
编号:YT345
英文名称:Pifithrin-α• hydrobromide
规格:25mg|5mg
本品是一种常用的p53抑制剂。Pifithrin-α能可逆性地抑制p53依赖的基因转录激活,例如cyclin G, p21/waf1和mdm2;也可以抑制p53介导的细胞凋亡。本产品可以用于细胞培养,也可以用于动物实验。Pifithrin-α可溶于DMSO或甲醇。
CAS:63208-82-2
分子式:C16H18N2OS·HBr
分子量:367.30
纯度:>98%。
储存条件:-20℃避光。
·N端Myc标签融合蛋白质粒
编号:YT482
英文名称:N-Myc plasmid(with CMV promoter)
规格:1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5"端含有一个可以编码Myc标签的序列,因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下:
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Myc tag | 679-708 |
| multiple cloning site | 711-784 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 827-848 |
| SV40 polyA signal | 860-1243 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1381-1687 |
| bla promoter | 1712-1836 |
| SV40 promoter | 1856-2194 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2229-3020 |
| HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal | 3021-3479 |
| pUC origin | 3608-4275 |
本质粒的图谱如下:
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件:-20℃。
N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)优惠价关键词:N端EGFP,N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白),N-EGFP plasmid(with CMV promoter),YT476
·YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法)
编号:YT526
英文名称:Total RNA Extraction Reagent(Trizol Method)
规格:100ml
本试剂是一种用于动植物细胞或组织及细菌总RNA抽提的试剂。本产品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法,抽提的方法和步骤完全相同。本试剂的颜色和TRIzol相同,加入氯*(代"仿")后上层呈无色,下层呈紫红色,便于吸取上层水相。
本试剂可以抽提长达15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。裂解细胞或和组织共匀浆时,本试剂可以保持样品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。每一百万细胞用本试剂抽提可得5-15μg RNA;每毫克组织用本试剂抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。每100ml 本试剂可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。抽提两个样品约需一小时。
本试剂抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protection assay,cDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deep sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
百奥莱博的本试剂(YT526)和Trizol(YT527)的成分有细微差别,实际抽提效果无任何显著差异。
注意事项:
1. 需自备氯*(代"仿"),异丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。DEPC水(YT528)可向百奥莱博订购。
2. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(体积比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q级水中,处理过夜,灭菌即成DEPC水。
3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量本试剂,并裂解样品后冻存。
4. 必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品呼气或说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
5. 本试剂含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触本试剂,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。
6. 本试剂抽提总RNA的同时,理论上也可抽提蛋白和DNA,但未经测试。有兴趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步骤进行操作。
储存条件:4℃,有效期一年。
N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白)优惠价关键词:N端EGFP,N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白),N-EGFP plasmid(with CMV promoter),YT476
·蛋白浓度测定试剂盒(BCA法)
编号:YT037
英文名称:BCA Protein Assay Kit
规格:5000次|500次|200次
本试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。
本试剂盒灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。在50-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT)低于1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用百奥莱博的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(YT034)。
试剂盒组份:
BCA试剂 A——————500ml×2
BCA试剂 B——————30ml
蛋白标准(BSA)————30ml×2
蛋白标准配制液 ———5ml
注意事项:
1. 需酶标仪一台,测定波长为540-595nm之间,562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但测定时,需根据比色皿的最小检测体积,适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积,样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
2. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景,请试用百奥莱博的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(YT034)。
3. 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但是切勿过热。
4. EDTA浓度必须小于10mM,不兼容EGTA。不适用BCA法时,请试用百奥莱博的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(YT034)。
储存条件:室温。
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文献和实验前言: NusA融合蛋白表达系统于9年前(1999年)由Davis发明,并在2000年由Novagen首先进行商业化设计和开发,特别推荐用于以NusA作为N端标签时提高在大肠杆菌中难溶的重组表达蛋白的可溶性。NusA融合蛋白表达系统面市至今,已经通过一些高通量表达筛选的评估确认其在可溶性改善方面的有效性。关于NusA融合表达蛋白去除或不去除NusA标签,目的蛋白仍然具有活性的报道也有很多。正是由于NusA标签系统的这种特性,使其成为目前在大肠杆菌表达体系中使用最为广泛的三个融合标签
检测、鉴定。 融合在N端的FLAG,其可以被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。 MBP(麦芽糖结合蛋白) MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合
绿色荧光蛋白的表达、检测及应用 2013-11-27 12:42:10 来源: 评论:0 我要评论
突变的方式,把第65位丝氨酸换成苏氨酸或胱氨酸,荧光强度提高了4~6倍。后来的研究中用到的gfp突变体都是在此基础上通过改变若干碱基而得到的。 gfp作为一种新型的非酶性报告基因,能与多种不同蛋白质的N端或C端融合表达而不影响各自的特征,即融合蛋白质在细胞内仍能行使正常功能,而且融合蛋白保持与GFP 相似的荧光特性,所以应用范围很广。如,将目的基因与gfp融合,导入 生物 体内进行表达,然后观察融合蛋白在细胞内的位置。检测简便,不需要任何外源底物或辅助因子,是一种直观性很强
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