Klenow片段(无外切酶活性)优惠促销

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北京百奥莱博专业生产销售Klenow片段(无外切酶活性)优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Klenow片段(无外切酶活性)优惠促销
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：YT510
规格：100U
英文名：Klenow Fragment，Exo-
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. 随机引物法进行DNA标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

我公司的Klenow片段(无外切酶活性)优惠促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：

·YT™免疫组化染色二抗稀释液
编号：YT889
英文名称：YT™ Secondary Antibody Dilution Buffer for Immunohistochemistry
规格：100ml
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、血清等的二抗稀释液，可以用于免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)染色时二抗的稀释和配制。

YT™免疫荧光染色二抗稀释液可以有效节约二抗。经本产品稀释的二抗可以在2-3周内重复使用3-5次。

YT™免疫组化染色二抗稀释液稀释的二抗孵育后背景极低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。

YT™免疫组化染色二抗稀释液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AP)和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂等物质，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，也不会干扰基于生物素的荧光检测。

YT™免疫组化染色二抗稀释液使用便捷。本产品无需添加任何额外的试剂，可以直接用于二抗的稀释。


图1. YT™免疫组化染色二抗稀释液用于免疫细胞化学(IC)的检测效果图。上图为HeLa细胞用一抗α-Tubulin Rabbit Polyclonal Antibody 和二抗辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)，并用DAB显色的检测效果图。图中可见非常清晰的红色荧光的微管形态。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

按照每次二抗稀释需要5-10ml二抗稀释液计算，一个包装的YT™免疫组化染色二抗稀释液可以稀释10-20次二抗。

注意事项：为了能使稀释的二抗可以反复多次使用，二抗孵育结束后稀释的二抗应立即存放在4℃，以便于后续重复使用。

储存条件：4℃，有效期一年。


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·胰岛素抵抗诱导剂(葡萄糖胺)
编号：YT326
英文名称：Glucosamine
规格：5g
本品是一种常用的胰岛素抵抗诱导剂，常用于诱导HepG2等肝细胞产生胰岛素抵抗。本Glucosamine可溶于水，溶解度可达到100mg/ml。

CAS：66-84-2
分子式：C6H13NO5·HCl
分子量：215.63
纯度：＞99%

储存条件：室温。

·COX IV抗体
编号：YT665
英文名称：anti-COX IV antibody
规格：>20次
本抗体是用人工合成的人COX IV Lys29附近的一段多肽进行适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。

真核细胞中的细胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase，简称COX)是一种异源寡聚酶，通常含有13个亚基，定位于线粒体内膜，是线粒体呼吸链的酶复合物，它可以从每4个还原性的细胞色素c得到一个电子，传递给一个氧分子，最终把一个氧分子转变成两个水分子。在此过程中细胞色素c氧化酶会结合4个质子用于产生2个水分子，同时把4个质子转移到膜的另外一侧产生质子梯度，即建立跨膜的电化学势，随后ATP合成酶可以利于该电化学势合成ATP。细胞色素c氧化酶中形成催化中心的3个最大的亚基由线粒体DNA编码，其余10个亚基包括COX IV由细胞核内的基因组DNA编码。细胞色素c氧化酶(COX)活性缺陷和人类多种疾病相关。

COX IV抗体可用作线粒体蛋白上样量的内参。

组份：
COX IV抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml

免疫原种属：人
免疫原：人工合成的含磷酸化Thr68的一段人Chk2多肽
宿主：兔
用途：WB,IP,IHC-P, IF,FCM
交叉反应性：人，小鼠，大鼠，猴，牛
COX IV分子量：～17kD
推荐稀释比例：WB(1:1000),IP(1:100),IHC-P(1:2000),IF(1:750),FCM(1:100)

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·IRS1抗体(胰岛素受体底物1抗体)
编号：YT811
英文名称：anti-IRS1 antibody;Insulin receptor substrate 1 antibody
规格：>20次
本抗体是用重组小鼠IRS1一段多肽(aa431-446)作为抗原制备而成的抗IRS1小鼠单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。

本IRS1抗体识别的是总IRS1(total IRS1)，可以检测内源性的IRS1，未发现和其它亚型如IRS2等有交叉反应。

IRS1(insulin receptor substrate 1)，也称IRS-1，是胰岛素受体(insulin receptor)激酶的主要底物。IRS1含有多个酪氨酸磷酸化位点，这些位点磷酸化后可以结合含有SH2结构域的蛋白，如PI3-K和GRB2等，从而介导胰岛素诱导的代谢和促生长信号。IRS1还含有30多个serine/threonine磷酸化位点。胰岛素刺激可以诱导IRS1的Ser302磷酸化。JNK和IKK可以磷酸化IRS-1的Ser307；AMPK家族的SIK-2可以磷酸化IRS1的Ser789。PKC可以调节IRS1的Ser612位点磷酸化，而IRS1的Ser636/639位点磷酸化受mTOR信号通路调控。PKCτ介导IRS1的Ser1101位点磷酸化。IRS1一方面介导了胰岛素的信号转导，但IRS1过表达或一些丝氨酸磷酸化也会导致胰岛素抵抗(insulin resistance)。

产品组份：
IRS1抗体————40μl
Western一抗稀释液————20ml

抗体参数：
免疫原物种：小鼠
免疫原：重组小鼠IRS1一段多肽(aa431-446)
克隆性：单克隆
宿主：小鼠
用途：WB,IP,IC
交叉反应性：人，小鼠，大鼠，猴，牛, 犬，猪
同种型：IgG2aκ
IRS1分子量：～180kD
推荐稀释比例：WB(1:500),IP(1:50),IC(1:250)

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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