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室温
9个月
Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
50次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京现货石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒(国产,进口),我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒(国产,进口),产品信息:
类别:RNA纯化
英文名:Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒 | ALH074 | 50次 |
本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA,然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
产品组分:
裂解液——————15ml
结合液——————25 ml
漂洗液——————10ml
蛋白酶K——————20mg(可选)
RNase-free H2O——————10ml
基因组DNA清除柱和收集管——————50套
RNA吸附柱和收集管室温——————50套
产品特点:
1.完全不使用有毒的苯酚,氯*(代"仿")等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速,简捷,单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保RNA高纯度,可直接用于下游各种实验。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
5. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留(DNase 消化也无法做到100%无残留),本试剂盒采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术,绝大多数DNA 已经被清除,可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
6. RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解,一般电泳后UV下只能看到模糊弥散(smear)带型,随着储存的时间越长,降解断裂越严重,甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
储存条件:室温,有效期9个月。
本品别名:石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒|石蜡包埋组织microRNA提取试剂盒|石蜡包埋组织microRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织microRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织miRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒|石蜡包埋组织总RNA纯化试剂盒
北京现货石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒(国产,进口)专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
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