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- 2025年12月04日
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高质量 实时定量PCR实验（Q-PCR, Real-time PCR)
- 提供商：
汉恒生物
qPCR背景介绍
在实时荧光定量PCR中，对每一轮循环的荧光信号强度进行监测并记录，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。一般而言，扩增曲线可以分成三个阶段：基线期（Baseline phase），指数增长期（Log-linear phase）和平台期（Plateau phase）（图一）。在扩增早期即基线期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系，所以根据最终的PCR产物量不能计算出初始模板量。只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可在此阶段进行定量分析。
流程图
汉恒提供服务项目
汉恒生物科技（上海）有限公司提供从引物设计，细胞或者组织样品处理，qPCR检测以及完整的数据报告等服务。为您提供优质的服务，为您的科研保驾护航。
客户提供：
1.细胞：细胞数106-107；组织：总量>100mg；DNA或RNA样品：总量>2 μg
2.靶基因信息：包括基因序列或GenBank 登录号等
3.背景资料：包括生物物种信息、基因功能、用途、特性、DNA/RNA 来源等
（备注：请在送样前，与技术确认具体送样情况。）
实例展示
（Hou Z ,Qin X ,Hu Y ,et al. 2019）
在研究长期锻炼保护心脏的分子机制中，研究人员对运动大鼠(Exe-exo)和久坐大鼠(Sed-exo)的外泌体进行miRNA-seq和qPCR，来确定研究目标与心脏保护相关的miR-342 5p。
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文献和实验A. Real-Time PCR Chemistry Real-time systems for PCR were improved by probe-based, rather than intercalator-based, PCR product detection. The principal drawback to intercalator-based detection of PCR product accumulation
of nucleic acids by PCR is best performed by real-time PCR. However, the following robust protocol, which uses radioactivity to quantify PCRproducts, remains useful when a real-time instrument is unavailable. The method can be easily adapted to other methods
（因为在处理过程中RNA极易降解，建议体系中加入适量RNA酶抑制剂。 实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）实验流程 一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。 在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA的断裂；取2ug进行RNA的甲醛
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