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详询
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- 英文名:
DNase I Treatment Kit
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大量
- 供应商:
Active Motif
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30 rxns
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文献和实验一、 DNA 酶切反应 1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键,要防止错加,漏加。使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。2、混匀反应体系后,将eppendorf管置于适当的支持物上(如插在泡沫塑料板上),37
进行,尽量避免星号活力。 一、 材料、试剂和仪器 1 材料:质粒DNA 2 试剂:限制性内切酶、ddH2O 3 仪器:微量移液枪,离心机,水浴锅, 电泳仪,紫外透射观测仪 注:酶切的选择原则一般是尽量扩大酶切体系,这样抑制因素得以稀释;基因组DNA或质粒DNA酶的用量较一般DNA大,一般为1μg/10U;所加酶的体积不能超过酶切总体积的1/10,否则甘油浓度会超过5%,会产生星号活力;对难切的质粒或基因组DNA应延长反应时间4—5hr, 甚至过夜。灭火限制
紫外灯下观察,用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长,宽度适当(一般2 cm左右)的胶块。 注意: ①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。 ②小心不要将回收胶切裂,同时注意与目的带相邻的切面要尽量平整。 3、将切好的回收胶块放在回收胶槽内,在切去胶块处加入低熔点琼脂糖胶,待其凝固后将其小心放回电泳槽继续进行电泳。小心低熔点琼脂糖凝胶块与原回收胶块的交界面易断裂。 4、待目的带完全进入低熔点琼脂糖胶后,在长波紫外灯下用清洗
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