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- 中国
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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输，4℃保存
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1年
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大量
- 供应商：
信裕生物
- 规格：
100 mL
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文献和实验免疫印迹(Western blot)简介和原理 免疫印迹用于鉴定能够与特异性抗体相互作用的大分子抗原（一般为蛋白质）并测定抗原的大小。蛋白质首先通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纤维素膜，聚偏乙烯二氟（PVDF）膜和阳离子尼龙膜等。首先把膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射，生色或化学发光的方法进行定位。 实验常规试剂 1.0 mol/L Tris•HCl
蛋白质印迹（Western blotting）方法原理和优化
抽滤 抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法。利用真空使溶解的样品滤过膜，蛋白质吸附到膜上，同时样品中其它成分被真空抽走。另外，也可直接将样品点在膜表面使之干燥。随后可对固定在膜上的蛋白质进行分析。 点印记和狭缝印记是抽滤方法的两种变型，用多支管装置将样品加到膜上成点状或狭缝图样。这些方法可用于快速定性筛选大量样品或定量分析类似样品，尤其是测试复杂分析中实验参数的适用性。 另一
，即可固定DNA 。 3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择： 带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度( SSC )，但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ，共价结合DNA 是最大优点。 硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC )，低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失， pH>9 ，DNA 不能与膜结合。 4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs
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