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- 2025年07月05日
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文献和实验【求助】180KD的膜蛋白western转膜条件怎样？（湿转）
zhywang4072 鄙人现在做一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢 wodezxn 我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。 zhibinx2007
电泳过程同样很重要啊。电转的时候其实只要预染marker只要转到膜上了，那么你的相应分子量的目的蛋白也就转过去了，所以这就是你摸索条件的指示带。3、电泳过程中有推荐TRICINE-SDS-PAGE胶来进行电泳，会更有利于小分子量蛋白的分离，研读了一些文献，这个效果应该还是很肯定的，但是鄙人没有做过这种电泳，所以给不了什么经验，我最终还是用普通SDS-PAGE胶做出来的，不过鉴于我的蛋白分子量是11KD，那么假如你是几KD甚至更小分子量的多肽，那么还是建议你用TRICINE-SDS-PAGE胶来电泳
蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错，另外提醒一句，特别小的蛋白Marker条带如果要显色好，上样一定要上足够的量哦。 二.预染蛋白分子量标准 预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如，已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处。如果使用预染Marker
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