组氨酸标签蛋白染色试剂盒

纯化新思路——构建双标签蛋白

你是否苦于你纯化的标签蛋白无法达到理想纯度而日夜发愁？是否在换了新的标签后仍不太满意而承受老板们鬼畜般的霹雳大吼？朋友别哭，相信这篇文章可以为你带来纯化高纯度蛋白的新思路。   进行蛋白质功能研究的关键在于得到高纯度蛋白。习惯于构建单标签的你想必遇到过杂质太多，蛋白表达量少甚至不稳定的情况。何不根据目的蛋白性质构建双标签蛋白进行两种不同亲和层析柱的纯化？没准会有意想不到的效果。 01双标签蛋白助力于目的蛋白的高特异性 单组氨酸标签蛋白的亲和层析结果通常不能保证杂蛋白的有效去除

[资源][原创] 蛋白标签纯化技术——CBP（钙调蛋白结合肽）

缓冲液中能够特异性的被钙调蛋白树脂捕捉吸附，并且在中性环境中能够被2 mM EGTA洗脱，这与6组氨酸亲合标签纯化体系相比反应条件要温和许多。仅有4-kDa 大小的CBP tag 与26-kDa GST 标签相比对蛋白分子的影响非常小。在所表达的蛋白分子上包含一个凝血酶或肠激酶列解位点，依靠它可以非常方便的移除CBP标签。在哺乳动物细胞中表达的标签纯化系统(两步纯化法用于高纯度的要求)Mammalian TAP System本系统同时用到了streptavidin binding peptide

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

动物和昆虫细胞表达系统，尤其是分泌蛋白的纯化中，His-tag系统则有局限。因为酵母和昆虫细胞的培养基pH通常为酸性，会干扰His-标签蛋白与IMAC纯化树脂的结合。而酵母和哺乳动物细胞培养基，则通常含有氨基酸会竞争His-标签的结合位点，如组氨酸，谷氨酰胺或精氨酸。 Strep-tag®系统对各宿主表达系统的适用情况较为理想。根据其纯化原理，酸性pH和有力的氨基酸不会影响Strep-标签蛋白与纯化树脂的结合（前文也曾提到，此系统的耐受pH范围为4-10）。而哺乳动物细胞培养基中存在的生物素需要注意