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负20度
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2年
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pCold-SUMO-His-FLAG
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100
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kelei-bio
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20μl
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文献和实验点突变 蛋白修饰 载体设计怎么做？磷酸化/乙酰化/乳酸化对照表收好
个化学基团"来开关功能，这个过程叫翻译后修饰（PTM），常见有磷酸化、乙酰化、乳酸化、SUMO 化、糖基化等。要在实验里研究某个修饰位点的作用，最常用办法是在载体上做点突变：把该位点的氨基酸换成"模拟修饰"或"去除修饰"的残基，再看过表达后的功能变化。说白了，你没法直接给细胞加一个磷酸基，但你能造一个"看起来像被磷酸化"的蛋白变体，来推断这个修饰干了什么。 突变载体在细胞里怎么验证功能 设计位点 → 构建点突变过表达载体（通常带标签如 FLAG/HA/EGFP）→ 病毒或质粒送进细胞 → 检测下游
liuruya 问别人要了个带GFP-tag（GFP-N2载体）的质粒，目的基因1.4kb，分子量约52kD，转染293T细胞能见荧光，WB杂不出来，设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag，仍然杂不出来WB。仔细检查过序列，不存在移码的问题，非常费解。有同学分析是空间位阻问题，不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么，或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢！！！ zhuqueleee
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