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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCDNA3.0
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: CMV
复制子: ColE1 ori，f1 ori
终止子: bGH poly(A) signal
质粒分类: 哺乳细胞真核载体；重组蛋白过表达质粒
质粒大小: 5446bp
质粒标签: 无
原核抗性: 氨苄青霉素Ampicillin 筛选标记: 新霉素Neomycin /G418
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: 293T等哺乳细胞
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: T7：TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物: SP6：ATTTAGGTGACACTATAGAA
备注: 常用的哺乳细胞真核表达载体
质粒简介
pCDNA3.0载体是专门设计用来在哺乳细胞中进行高水平的稳定表达和瞬时表达。其中人巨细胞病毒早期启动子（CMV）在广泛的哺乳动物细胞中可以实现高表达。另外为筛选稳定细胞系提供了新霉素抗性基因，可用G418筛选。 pcDNA3.0 is 5.4 kb vectors designed for high-level stable and transient expression in mammalian hosts. High-level stable and non-replicative transient expression can be carried out in most mammalian cells. The vectors contain the following elements: Human cytomegalovirus immediate-early (CMV) promoter for high-level expression in a wide range of mammalian cells. Neomycin resistance gene for selection of stable cell lines. 特征片段： CMV promoter: bases 209-863 T7 promoter: bases 864-882 Polylinker: bases 889-994 Sp6 promoter: bases 999-1016 BGH poly A: bases 1018-1249 SV40 promoter: bases 1790-2115 SV40 origin of replication: bases 1984-2069 Neomycin ORF: bases 2151-2945 SV40 poly A: bases 3000-3372 ColE1 origin: bases 3632-4305 Ampicillin ORF: bases 4450-5310
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文献和实验wangch84 各位高手，兄弟最近忙于质粒构建，意图将一段长约4000 bp的片段，通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下： 1. 通过LA Taq酶扩增，并纯化回收目的片段（引物中带有酶切位点，保护性碱基＝3，上游带有Kozak序列）；由于回收效率很高，所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段，H2O 20 μl，10 X K BUFFER 4 μl，两种酶各2 μl，37℃作用过夜（12-14 h
一、导论 已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA，这些方法都含有以下3个步骤: 细菌培养物的生长。 细菌的收获和裂解 质粒DNA的纯化。 (一)细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期，就可以大量提纯质粒。 此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体(如pBR
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
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