IgHV/IgH 免疫球蛋白重链可变区抗体

以反向PCR扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因

关键词: 单链抗体; 重链; 可变区; 反向PCR ; 宫颈癌 　　单克隆抗体(mAb) V 区cDNA 序列的克隆是构建单链抗体(ScFv) 的关键一步[1 ] 。通常是在抗体V 区序列两头5′和3′端设计带简并碱基的引物, 用普通PCR 法进行扩增[2 ] 。该法虽看似简单, 但局限性很大, 若遇到同源性差且复杂的序列, 则难以获得。同时, 因带有简并碱基, 可使PCR 产物不纯

PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增

PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增       如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。   【材料和试剂】 （1）PCR仪 （2）Taq酶 （3）氯仿 （4）琼脂糖   【操作步骤】  （1）在200μl离心管中混匀下列成分：     模板

免疫球蛋白可变区、恒定区和绞链区

4)和3个CDRs。VH和VI-中的各氨基酸可编号，一些保守的氨基酸都有其固定的编号位置，将不同序列和已编号的序列进行对比以后，在某个位置上多出来氨基酸编号为A、B、C等，如27A、27B、27C、106A等。VH和VL的3个CDR共同组成Ig的抗原结合部位，识别及结合抗原，并决定抗体识别的特异性。   免疫球蛋白轻、重链可变区氨基酸顺序的编号       重链和轻链的C区分别称为CH和CL，不同型别(x或入)CI。的长度基本一致．但不同类别IgCH的长度不一，有的包括CHl～CH3，有的为CHl