KM71毕赤酵母菌

酵母表达系统

质粒转化人巴斯德毕赤酵母菌株(如GS1 15，KM71)一将转化物接种HIS4缺陷平板进行第一轮筛选一用不同浓度的G418平板进行第二轮筛选一挑选10~20个克隆进行小规模诱导培养，鉴定外源基因的表达量一挑选高水平表达菌株进行大规模诱导培养以制备外源基因的表达蛋白质。 4、在酵母表达载体中高效表达外源基因的策略 （1）增加整合在酵母染色体上的目的基因剂量 适当增加目的基因整合到酵母染色体上的拷贝数(即基因剂量)是有效提高外源基因表达量的基本策略。Clare等在利用毕赤酵母表达破伤风毒素片段时发现

Pichia酵母表达系统使用心得

。 Xiang Yang：EasySelect试剂盒准备了三种菌株：X33，GS115和KM71H。我倾向于选择X33，因为这个菌株转化率和表达量相对而言较高，如果你有电转仪（electroporator），可以尝试一下。如果没有的话，EasySelect也准备了化学转化试剂――EasyComp Transformation，但是由于转化率的缘故，我建议使用电转仪。 leslie：在得到了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了，试剂盒携带有的是X-33，GS115和KM71H这三种毕赤酵母（另外常用

Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统使用总结

，但是由于转化率的缘故，我建议使用电转仪。 leslie：在得到了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了，试剂盒携带有的是X-33，GS115和KM71H这三种毕赤酵母(另外常用的还有SMD1168)，每种酵母的特点有些不尽相同(Manual上写的很清楚)，其中X-33由于是野生型，因此耐受性比较好，如果担心转化率的话可以考虑这种酵母菌，而GS115与X33一样都是属于MUT+表现型，也就是说可以在含甲醇的培养基中快速生长，但是据说会对外源基因表达有影响，KM71是MUT-型酵母，在甲醇培养基中