| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | VSV-G |
| 质粒类型: | 慢病毒包装系统载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | -- |
| 启动子: | -- |
| 克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
| 载体大小: | -- |
| 5' 测序引物及序列: | -- |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | -- |
| 筛选标记: | -- |
| 备注: | -- |
| 产品目录号: | -- |
| 稳定性: | -- |
| 组成型: | -- |
| 病毒/非病毒: | -- |
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃低温保存
- 保质期:
三年
- 英文名:
VSV-G
- 库存:
20
- 供应商:
泽叶生物
载体基本信息
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文献和实验为什么你的慢病毒总是不出毒?|从载体设计到包装全流程拆解失败诱因
Vector)、gag/pol包装质粒、rev辅助质粒以及VSV-G包膜质粒。任何一个包装质粒出现问题,都可能导致病毒组装失败。因此,在出现异常结果时,首先应确认包装质粒质量是否合格。 图 三质粒慢病毒包装系统示意图[PMID: 28083834] 原因三:293T细胞状态不佳 理想包装状态下细胞汇合度约70%~80%、生长活跃、无支原体污染、传代次数适中。而在实际实验中,经常出现细胞过度融合、细胞老化、频繁冻融、隐性支原体感染,这些问题都会显著
45 s,30个循环;72 ℃延伸10 min。取10 μL PCR产物在20 g/L琼脂糖凝胶电泳检测。 1.7 多重PCR扩增 分别将上述1.5合成的FMDV,SVDV和VSV cDNA产物作为模板,在同一管内同时加入3对引物进行PCR扩增。反应条件及PCR反应参数如上1.6。PCR扩增结束后取10 μL扩增产物于20 g/L的琼脂糖凝胶(含0.5 μg/ mL溴化乙锭)中电泳检测。
VSV-G包膜蛋白的话,可以通过两次超速离心进行浓缩,从而最高可以获得滴度高达1011-1012IU/ml的慢病毒载体。之后可以将病毒载体溶解在PBS, HBSS或者DMEM中,并置于-800C储存。储存溶液添加血清会帮助提高病毒冻融时的存活率,然而有些病毒在侵染细胞时,血清会有干扰,所以需要依据具体病毒种类考虑是否添加血清。 病毒滴度:含VSV-G的慢病毒载体,其滴度在浓缩前一般为107IU/ml,浓缩之后可以达到109-107IU/ml 。含有荧光标记或者其它报告基因的病毒载体
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