| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pEE12.4, pEE 12.4 |
| 质粒类型: | 哺乳动物细胞蛋白表达载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 启动子: | hCMV-MIE |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 7569 bp |
| 5' 测序引物及序列: | -- |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | 氨苄 |
| 筛选标记: | GS (Glutamine Synthetase, 谷氨酰胺合成酶) |
| 备注: | 配套细胞是NSO细胞或者CHOK1SV细胞 |
| 产品目录号: | -- |
| 稳定性: | 稳定表达 |
| 组成型: | -- |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥7000
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pEE12.4
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
pEE 12.4载体基本信息
pEE 12.4载体质粒图谱和多克隆位点信息
pEE 12.4载体简介
Lonza生物公司的Glutamine Synthetase(GS, 谷氨酰胺合成酶)基因表达系统，利用谷氨酰胺合成酶筛选标记，能够高水平的在哺乳细胞内表达目的基因。
GS酶是生物体内以谷氨酸和氨为底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能够被甲硫氨酸砜亚胺（methionine sulphoximine，MSX）选择性的抑制。一些哺乳动物细胞，例如小鼠骨髓瘤细胞(NSO细胞系)无法表达GS，所以在不添加谷氨酰胺的情况下，细胞将无法生长。对于这些细胞系，在无谷氨酰胺的培养基内，一个转染的GS基因可以作为一个筛选标记。其他的一些细胞系，例如CHO-KI，能够产生内源性的GS酶。对于这些细胞，在无谷氨酰胺培养基内，在高水平足够抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亚胺）的作用下，可以对细胞的生长提供一个选择压力。
1992年，Bebbington等首次报道了使用GS基因细胞系统表达重组的抗体。该载体能够被用来构建快速，高产量，稳定的单克隆抗体表达细胞系。
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文献和实验相关实验
/actions/archive/post/24367 79_0.htm pBI 121表达载体的图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2887599_0.html PBV220的物理图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3344331_0.html 真核表达载体pEE14的图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3520950_0.html
至总体积 10 ul混合后置 14～16 ℃ 水浴 6～12 h。【注意事项】1）通常 DNA 插入片段与载体 DNA 的摩尔比为 3:1 或 2:1，需根据 DNA 分子量计算，而不取决于浓度；2）平齐末端连接时，插入片段的量要远远大于载体 DNA 的量，可以为 5:1 或更多，即使这样，连接效率仍然很低。3）有时 DNA 一端是粘端，另一端是平端，这种连接与双酶切粘端连接相似；4）不匹配末端需要连接时，首先要将末端处理成平端，然后再进行连接反应。六、重组质粒的转化【实验目的】学习和掌握感受
为非溶性蛋白，也可被单克隆抗体柱层析，重新还原的产物可以被抗Derpl血清识别，其结合率优于pGEX克隆产物。为了减少繁琐，表达更好的重组蛋白，有人尝试以Der p1的原酶和酶原放人同一酵母载体表达，效果良好。 3．哺乳动物表达 构建一个扩大的载体PEE6．HCMV．GS，从中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达Derpl和Derp2。人巨细胞病毒(CMV)启动子(ACMD)和谷胱甘肽合成酶基因，通过放大质粒拷贝数增加细胞内酶高效表达，以控制抗代谢产物硫代
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