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- HZbscience
- 中国/美国/德国
- HZ0359
- 2025年07月11日
企业认证
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pEE12.4
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5μl
pEE12.4
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0359 | pEE12.4 | 20μl |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | hCMV-MIE |
|---|---|
| 复制子: | Pee6 ori |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，抗体表达载体 |
| 质粒大小: | 7569bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧 LB |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒简介
GS酶是生物体内以谷氨酸和氨为底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能够被甲硫氨酸砜亚胺（methionine sulphoximine，MSX）选择性的抑制。一些哺乳动物细胞，例如小鼠骨髓瘤细胞(NSO细胞系)无法表达GS，所以在不添加谷氨酰胺的情况下， 细胞将无法生长。对于这些细胞系，在无谷氨酰胺的培养基内，一个转染的GS基因可以作为一个筛选标记。其他的一些细胞系，例如CHO-KI，能够产生内源 性的GS酶。对于这些细胞，在无谷氨酰胺培养基内，在高水平足够抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亚胺）的作用下，可以对细胞的生长提供一个选择压力。
质粒图谱
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- 作者
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文献和实验/actions/archive/post/24367 79_0.htm pBI 121表达载体的图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2887599_0.html PBV220的物理图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3344331_0.html 真核表达载体pEE14的图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3520950_0.html
至总体积 10 ul混合后置 14～16 ℃ 水浴 6～12 h。【注意事项】1）通常 DNA 插入片段与载体 DNA 的摩尔比为 3:1 或 2:1，需根据 DNA 分子量计算，而不取决于浓度；2）平齐末端连接时，插入片段的量要远远大于载体 DNA 的量，可以为 5:1 或更多，即使这样，连接效率仍然很低。3）有时 DNA 一端是粘端，另一端是平端，这种连接与双酶切粘端连接相似；4）不匹配末端需要连接时，首先要将末端处理成平端，然后再进行连接反应。六、重组质粒的转化【实验目的】学习和掌握感受
为非溶性蛋白，也可被单克隆抗体柱层析，重新还原的产物可以被抗Derpl血清识别，其结合率优于pGEX克隆产物。为了减少繁琐，表达更好的重组蛋白，有人尝试以Der p1的原酶和酶原放人同一酵母载体表达，效果良好。 3．哺乳动物表达 构建一个扩大的载体PEE6．HCMV．GS，从中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达Derpl和Derp2。人巨细胞病毒(CMV)启动子(ACMD)和谷胱甘肽合成酶基因，通过放大质粒拷贝数增加细胞内酶高效表达，以控制抗代谢产物硫代
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