| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 载体名称: | pFC32K ; pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi |
| 质粒类型: | 哺乳动物载体；NanoLuc素酶报告载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | -- |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | CMV IE |
| 载体大小: | 5119 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | NanoLuc |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 新霉素（Neomycin） |
| 克隆菌株: | TOP10等常规菌株 |
| 宿主细胞（系）: | 常规哺乳动物细胞等 |
| 备注: | pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi载体表达NanoLuc融合蛋白；NanoLuc萤光素酶（Nluc）更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）。 |
| 产品目录号: | ZY1311 |
| 稳定性: | 瞬表达或稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥1500
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY1311
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
pFC32K载体基本信息
pFC32K载体质粒图谱和多克隆位点信息
pFC32K载体简介
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi 更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）的 NanoLuc萤光素酶（Nluc）非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛：作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像（BLI）探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移（BRET）研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。 NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白；有两类形式载体可供选择： pNLF 载体系列：产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法（多克隆位点）将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 pF 载体系列：使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白；Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法，基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI，可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列，快速、高效和高保真。 特点 - 优点 轻松定量蛋白丰度变化：使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样，来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号，进而检测细胞内蛋白水平。 生物相关性更高：NanoLuc 报告基因光信号更强，内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到，可避免过度表达造成的假象。 使蛋白的细胞内动态变化可视化：NanoLuc 报告基因光信号更强，缩短了成像曝光时间，无需反复激发样本，从而降低了激发造成的细胞毒性反应。 改进 BRET 研究技术：NanoLuc 拥有更强的光信号，蓝移的发射光谱，因而与荧光受体的光谱交叉更少，信噪比更佳，动态范围更宽。 灵活的克隆选择：可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡：所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。 应用 化合物筛选 蛋白: 蛋白相互作用 蛋白: 小分子相互作用 生物发光成像 蛋白稳定性研究
pFC32K载体序列
LOCUS KF811456 5119 bp DNA circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K, complete sequence.
ACCESSION KF811456
VERSION KF811456.1 GI:576890565
KEYWORDS .
SOURCE NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K
ORGANISM NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1 (bases 1 to 5119)
AUTHORS McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (04-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5119
/organism="NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:1454399"
regulatory 1..742
/regulatory_class="promoter"
/note="CMV immediate early enhancer/promoter"
intron 857..989
/note="chimeric"
regulatory 1033..1052
/regulatory_class="promoter"
/note="T7 promoter"
misc_feature 1056..1063
/note="used in Flexi vector cloning; SgfI site"
CDS 1087..1422
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="barnase"
/protein_id="AHH41355.1"
/db_xref="GI:576890567"
/translation="MAQVINTFDGVADYLQTYHKLPDNYITKSEAQALGWVASKGNLA
DVAPGKSIGGDIFSNREGKLPGKSGRTWREADINYTSGFRNSDRILYSSDWLIYKTTD
HYQTFTKIR"
misc_feature 1442..1447
/note="EcoICRI site"
misc_feature 1447..1461
/note="linker, C-terminal NanoLuc"
CDS <1462..1974
/note="C-terminus"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="NanoLuc luciferase"
/protein_id="AHH41356.1"
/db_xref="GI:576890568"
/translation="VFTLEDFVGDWRQTAGYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQR
IVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQIEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDG
VTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGTLWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVT
GWRLCERILA"
regulatory 2108..2329
/regulatory_class="polyA_signal_sequence"
/note="SV40 late polyA signal"
regulatory 2428..2840
/regulatory_class="promoter"
/note="SV40 early enhancer/promoter"
regulatory 2854..2920
/regulatory_class="promoter"
/note="Em7 bacterial promoter"
gene 2934..3728
/gene="neoR/kanR"
CDS 2934..3728
/gene="neoR/kanR"
/function="resistance to neomycin and kanamycin"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="neomycin phosphotransferase"
/protein_id="AHH41354.1"
/db_xref="GI:576890566"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
EHQGLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
regulatory 3792..3840
/regulatory_class="polyA_signal_sequence"
/note="synthetic polyA signal"
rep_origin 4076..4112
/note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN
1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcgat cgccatggaa taagtaagga
1081 atccacatgg cacaggttat caacacgttt gacggggttg cggattatct tcagacatat
1141 cataagctac ctgataatta cattacaaaa tcagaagcac aagccctcgg ctgggtggca
1201 tcaaaaggga accttgcaga cgtcgctccg gggaaaagca tcggcggaga catcttctca
1261 aacagggaag gcaaactccc gggcaaaagc ggacgaacat ggcgtgaagc ggatattaac
1321 tatacatcag gcttcagaaa ttcagaccgg attctttact caagcgactg gctgatttac
1381 aaaacaacgg accattatca gacctttaca aaaatcagat aatgtttaat gaccccgtgt
1441 cgagctctcg gctcgagcgg cgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag
1501 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag
1561 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg
1621 aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag
1681 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg
1741 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg
1801 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg
1861 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga
1921 gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaaggccgc
1981 gactctagag tcgacctgca ggcatgcaag ctgatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg
2041 aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc aataactagc ataacccctt ggggcggccg
2101 cttcgagcag acatgataag atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag
2161 tgaaaaaaat gctttatttg tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata
2221 agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg
2281 gagatgtggg aggttttttt aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtaa aatcgaattt
2341 taacaaaata ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
2401 ggtatttcac accgcatacg cggatctgcg cagcaccatg gcctgaaata acctctgaaa
2461 gaggaacttg gttaggtacc ttctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt
2521 tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
2581 attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
2641 gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc
2701 taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg
2761 cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg
2821 gaggcctagg cttttgcaaa aagcttaatt aactgttgac aattaatcat cggcatagta
2881 tatcggcata gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc caggaggcag atcatgattg
2941 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg
3001 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg
3061 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg
3121 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg
3181 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc
3241 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc
3301 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc
3361 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc
3421 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg
3481 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct
3541 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt
3601 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc
3661 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt
3721 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc
3781 acgatggccg caataaaata tctttatttt cattacatct gtgtgttggt tttttgtgtg
3841 aatcgatagc gataaggatc ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt
3901 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac ccggtatcag
3961 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
4021 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
4081 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
4141 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
4201 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
4261 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
4321 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
4381 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
4441 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
4501 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
4561 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
4621 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atttcaagaa gatcctttga
4681 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
4741 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttata gtccggaaat acaggaacgc
4801 acgctggatg gcccttcgct gggatggtga aaccatgaaa aatggcagct tcagtggatt
4861 aagtgggggt aatgtggcct gtaccctctg gttgcatagg tattcatacg gttaaaattt
4921 atcaggcgcg attgcggcag tttttcgggt ggtttgttgc catttttacc tgtctgctgc
4981 cgtgatcgcg ctgaacgcgt tttagcggtg cgtacaatta agggattatg gtaaatccac
5041 ttactgtctg ccctcgtagc catcgagata aaccgcagta ctccggccac gatgcgtccg
5101 gcgtagagga tcgagatct
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文献和实验相关实验
研究应用｜使用共聚焦显微镜观察狨猴大脑皮层和丘脑之间神经结构
人类的前额叶皮层 (PFC) 不成比例地扩大，负责高级认知和执行机能。它的运转失灵可能导致精神疾病，如精神分裂症和阿尔茨海默病。人们对小鼠 PFC 进行了积极研究，但它缺乏与颗粒状额叶皮层相对应的区域，这表明它与灵长类动物存在巨大的结构性差异。因此，我们的研究小组正在使用狨猴这种原产于南美洲的小型猴子作为灵长动物模型。 在这项实验中，我们研究了 PFC 与丘脑网状核 (TRN) 之间的相互作用，后者是丘脑周围的一组抑制性神经元。TRN 就像一扇门，控制着从大脑皮层向丘脑的信息传输。我们研究
wanglingyun1981 :)各位大虾帮帮忙，用绿色荧光蛋白以及neo构建载体，转染牛成纤维细胞后，开始是绿色荧光还很亮，可是G418筛选一段时间后，会荧光会越来越弱，到最后筛出单克隆，也几乎没有有荧光的单克隆了。原因是什么？有好的解决办法吗？谢谢各位 ！！ 绿色荧光蛋白用的cmv启动子。 slytjiaofei 1.开始时的荧光很强，这个很好解释，因为开始时未进行G418筛选，所以发绿色荧光的细胞有两部
就可以了。 如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题 你可以根据质粒图谱看，定向将启动子CMV后 将基因定向克隆进去，利用酶切反应及连接的特异性。 ps： 感觉你对自己的实验目的都不是很清楚，这很危险！宁可不做，就怕费力不讨好！ bigbang_0_0 用pEGFP质粒，很适合GFP标签的蛋白的表达； 如果做稳定转染，需要用G418筛选标记 (neo r)
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