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- XYbscience
- 中国/美国
- XY8203
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
三年
- 英文名：
pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin
- 库存：
60
- 供应商：
信裕生物
基本信息
| 质粒类型: | CRISPR/Cas系统 |
|---|---|
| 载体大小: | 4952 bp (查看载体序列) |
| 载体抗性: | Ampicillin |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| XY8203 | pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin | 5ug质粒 |
¥1000.00 |
质粒图谱
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文献和实验CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
的原件与表达 Cas9 的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行基因操作，在 PAM (5'-NGG) 上游～3bp 进行切割，如下图所示。因此本实验的关键步骤是设计一对 20bp（不包括 NGG 在内的）完全互补的 oligo 插入到如上图所示的 filler。另 U6 启动子需要 5' 端的 G 起始转录，因此若设计的 oligo 第一个碱基非 G，需额外增加一个 G。操作详细流程1. 设计 sgRNA关于 sgRNA 的设计我们有专门开过一篇文章《一文掌握
性维持 → 确定工作浓度 快速版： 载体带 Puro 抗性 → puromycin，多数细胞 1~10 μg/ml 载体带 Neo 抗性 → G418，浓度范围更大，筛选周期更长 载体带 Bsd 抗性 → blasticidin，起效快、用量低 双载体系统（如 Cas9 + sgRNA）→ 两种抗生素同时维持，各取筛选浓度的 1/2~1/4 或更低 --- 一、三种常用抗生素对比 Puromycin（嘌呤霉素） Neomycin/G418 Blasticidin（杀
继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计，Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1）CRISPR-cas9 最主要的要求：PAM 序列为 NGG。2）sgRNA，即 cas9 guide RNA，是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割，所以一般是 20 个碱基，不含 PAM 序列。3）设计的 sgRNA 一定有效吗？一般设计
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