- ¥900
- XY-Bioscience
- XY06007V
- 中国/上海
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
分泌表达T载体pBET-7
- 保质期：
见说明书
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
保存温度：4-8 ℃ 保存于20%乙醇溶液中
- 规格：
20μl
pBET-7载体是高效表达T载体，线性化载体末端含有突出的碱基“T”，可以将3’-末端含有“A”的PCR扩增产物高效率的连接至pBET-7载体上。该载体含有完整的表达元件，如Plac启动子、RBS、转录终止子等。在表达框内N-末端含有PelB信号肽基因序列，可以引导外源基因以分泌的方式表达，C-末端含有His6标签和c-myc标签序列，可以与外源基因融合表达，得到C-末端融合有His6和c-myc标签的蛋白。该融合蛋白可以用His6标签进行亲和纯化，还可以用抗c-myc标签的抗体进行检测。
分泌表达T载体pBET-7产品特色
一步法完成基因克隆与表达载体的构建，所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。
成分
pBET-7（70ng/μl） 20μl 1支
Plbu 150μl 1支
PNETR 150μl 1支
分泌表达T载体pBET-7保存条件
保存温度：-20℃
使用方法
1. 按照连接酶的说明书设置连接反应体系，进行连接反应。
2. 将连接反应产物加入100μl感受态细胞中，冰水浴放置30分钟。
3. 迅速置于42℃水浴热激2分钟，迅速在冰水浴放置2分钟。
4. 加入900μl 2YT（或LB）培养基，37℃，180rpm振荡培养45分钟。高速离心收集菌体，去掉800μl上清，留200μl重悬细胞。
5. 将200μl细胞重悬液涂布在含有相应抗生素的琼脂平板培养基上，37℃倒置培养过夜，形成单克隆。
6. 挑取单菌落，鉴定阳性克隆。
分泌表达T载体pBET-7注意事项
1. 连接反应请在16℃以下进行，温度升高较难形成环状DNA。连接时间控制在4℃反应过夜或者16℃反应2小时至4小时。对于较难连接的反应，可以4℃过夜和16℃连接2小时交替连接。反应时间过短或者温度高较难筛选得到阳性克隆。
2. 为提高克隆鉴定的效率，尽量减少假阳性，保证鉴定克隆为正向插入克隆，在用PCR方法进行阳性克隆鉴定时，应采用载体上游引物和扩增片段的下游引物进行鉴定或者采用载体下游引物和扩增片段的上游引物进行鉴定。
产品目录
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 报价(元) |
| XY06007V | 分泌表达T载体pBET-7 | 20μl | 900 |
| XY06007AS | 分泌表达T载体试剂盒I | 5μl | 300 |
| XY06007A | 分泌表达T载体试剂盒I | 20μl | 1000 |
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文献和实验pMBP-P 大肠杆菌质粒 Amp 分泌表达，His和MBP标签，带凝血酶位点 pMal-C2x 大肠杆菌质粒 Amp 表达MBP标签蛋白，原核表达载体 pMal-P2x 大肠杆菌质粒 Amp pMal-P
、离心后去上phenyl－sephorase柱。但发现活性大部分还在沉淀中。测了一下蛋白浓度是20mg/ml。是不是浓度太高啊？ 30％－60％硫酸铵沉淀可能对你的目的蛋白来讲，太粗略了，如你所言，目的蛋白可能在沉淀中，可否分级沉淀，３０％－５０％，５０％－６０％，再测一下活性可能就分开了，20mg/ml的蛋白浓度对于层析是有点高，洗脱液浓度变化或PH的改变都会使蛋白有损失，最好不要超过１０mg/ml。 59) 我的蛋白是用pGEX-4T载体在BL21中表达的，表达量很高，形成包涵
不要超过10mg/ml。 59)我的蛋白是用pGEX-4T载体在BL21中表达的,表达量很高,形成包涵体,为了获得可溶性蛋白,我现在尝试用较低浓度的诱导剂诱导,此前用不同浓度诱导做过对比,电泳后表达量的差异不大;但当我再降低温度诱导后发现,超声处理后的上清液中目的蛋白条带很微弱,大部分目的蛋白还是在沉淀中;这和我降低诱导剂前做的不一样(同温度),为什么目的蛋白的可溶表达会不稳定呢?对同一菌种应该是固定的吧?我很迷惑. 另外,请问,一般情况下28度,30度诱导时间应该分别多少才合适?我们的光度
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