| 出品公司: | |
|---|---|
| 别名: | pQE31, pQE 31 |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达载体 |
| 表达水平: | 低拷贝 |
| 启动子: | T5 |
| 克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
| 载体大小: | 3463 bp |
| 5' 测序引物及序列: | pQE30-F: AGCGGATAACAATTTCACACAG |
| 3' 测序引物及序列: | pQE30-R: TTCTGAGGTCATTACTGGATC |
| 载体标签: | N-His |
| 载体抗性: | Ampicillin |
| 备注: |
pQE vectors and constructs can be maintained in any E. coli strain that is ampicillin-sensitive and carries the pREP4 repressor plasmid, or harbors the lacIq gene on the F-factor episome. 配套表达菌株为M15[pREP4].
|
| 产品目录号: | ZY32915 |
| 稳定性: | 瞬时表达 Transient |
| 组成型: | 组成型 Constitutive |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃低温保存
- 保质期:
三年
- 英文名:
pQE-31
- 库存:
20
- 供应商:
泽叶生物
pQE31载体基本信息
pQE31载体质粒图谱和多克隆位点信息
pQE31载体简介
pQE31载体序列
DEFINITION pQE-31
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT ORIGDB|GenBank
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
COMMENT VNTOAUTHORAD1|Novagen Inc.|
FEATURES Location/Qualifiers
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EIGASLIKHW*"
ORIGIN
1 CTCGAGAAAT CATAAAAAAT TTATTTGCTT TGTGAGCGGA TAACAATTAT AATAGATTCA
61 ATTGTGAGCG GATAACAATT TCACACAGAA TTCATTAAAG AGGAGAAATT AACTATGAGA
121 GGATCTCACC ATCACCATCA CCATACGGAT CCGCATGCGA GCTCGGTACC CCGGGTCGAC
181 CTGCAGCCAA GCTTAATTAG CTGAGCTTGG ACTCCTGTTG ATAGATCCAG TAATGACCTC
241 AGAACTCCAT CTGGATTTGT TCAGAACGCT CGGTTGCCGC CGGGCGTTTT TTATTGGTGA
301 GAATCCAAGC TAGCTTGGCG AGATTTTCAG GAGCTAAGGA AGCTAAAATG GAGAAAAAAA
361 TCACTGGATA TACCACCGTT GATATATCCC AATGGCATCG TAAAGAACAT TTTGAGGCAT
421 TTCAGTCAGT TGCTCAATGT ACCTATAACC AGACCGTTCA GCTGGATATT ACGGCCTTTT
481 TAAAGACCGT AAAGAAAAAT AAGCACAAGT TTTATCCGGC CTTTATTCAC ATTCTTGCCC
541 GCCTGATGAA TGCTCATCCG GAATTTCGTA TGGCAATGAA AGACGGTGAG CTGGTGATAT
601 GGGATAGTGT TCACCCTTGT TACACCGTTT TCCATGAGCA AACTGAAACG TTTTCATCGC
661 TCTGGAGTGA ATACCACGAC GATTTCCGGC AGTTTCTACA CATATATTCG CAAGATGTGG
721 CGTGTTACGG TGAAAACCTG GCCTATTTCC CTAAAGGGTT TATTGAGAAT ATGTTTTTCG
781 TCTCAGCCAA TCCCTGGGTG AGTTTCACCA GTTTTGATTT AAACGTGGCC AATATGGACA
841 ACTTCTTCGC CCCCGTTTTC ACCATGGGCA AATATTATAC GCAAGGCGAC AAGGTGCTGA
901 TGCCGCTGGC GATTCAGGTT CATCATGCCG TTTGTGATGG CTTCCATGTC GGCAGAATGC
961 TTAATGAATT ACAACAGTAC TGCGATGAGT GGCAGGGCGG GGCGTAATTT TTTTAAGGCA
1021 GTTATTGGTG CCCTTAAACG CCTGGGGTAA TGACTCTCTA GCTTGAGGCA TCAAATAAAA
1081 CGAAAGGCTC AGTCGAAAGA CTGGGCCTTT CGTTTTATCT GTTGTTTGTC GGTGAACGCT
1141 CTCCTGAGTA GGACAAATCC GCCCTCTAGA GCTGCCTCGC GCGTTTCGGT GATGACGGTG
1201 AAAACCTCTG ACACATGCAG CTCCCGGAGA CGGTCACAGC TTGTCTGTAA GCGGATGCCG
1261 GGAGCAGACA AGCCCGTCAG GGCGCGTCAG CGGGTGTTGG CGGGTGTCGG GGCGCAGCCA
1321 TGACCCAGTC ACGTAGCGAT AGCGGAGTGT ATACTGGCTT AACTATGCGG CATCAGAGCA
1381 GATTGTACTG AGAGTGCACC ATATGCGGTG TGAAATACCG CACAGATGCG TAAGGAGAAA
1441 ATACCGCATC AGGCGCTCTT CCGCTTCCTC GCTCACTGAC TCGCTGCGCT CGGTCGTTCG
1501 GCTGCGGCGA GCGGTATCAG CTCACTCAAA GGCGGTAATA CGGTTATCCA CAGAATCAGG
1561 GGATAACGCA GGAAAGAACA TGTGAGCAAA AGGCCAGCAA AAGGCCAGGA ACCGTAAAAA
1621 GGCCGCGTTG CTGGCGTTTT TCCATAGGCT CCGCCCCCCT GACGAGCATC ACAAAAATCG
1681 ACGCTCAAGT CAGAGGTGGC GAAACCCGAC AGGACTATAA AGATACCAGG CGTTTCCCCC
1741 TGGAAGCTCC CTCGTGCGCT CTCCTGTTCC GACCCTGCCG CTTACCGGAT ACCTGTCCGC
1801 CTTTCTCCCT TCGGGAAGCG TGGCGCTTTC TCATAGCTCA CGCTGTAGGT ATCTCAGTTC
1861 GGTGTAGGTC GTTCGCTCCA AGCTGGGCTG TGTGCACGAA CCCCCCGTTC AGCCCGACCG
1921 CTGCGCCTTA TCCGGTAACT ATCGTCTTGA GTCCAACCCG GTAAGACACG ACTTATCGCC
1981 ACTGGCAGCA GCCACTGGTA ACAGGATTAG CAGAGCGAGG TATGTAGGCG GTGCTACAGA
2041 GTTCTTGAAG TGGTGGCCTA ACTACGGCTA CACTAGAAGG ACAGTATTTG GTATCTGCGC
2101 TCTGCTGAAG CCAGTTACCT TCGGAAAAAG AGTTGGTAGC TCTTGATCCG GCAAACAAAC
2161 CACCGCTGGT AGCGGTGGTT TTTTTGTTTG CAAGCAGCAG ATTACGCGCA GAAAAAAAGG
2221 ATCTCAAGAA GATCCTTTGA TCTTTTCTAC GGGGTCTGAC GCTCAGTGGA ACGAAAACTC
2281 ACGTTAAGGG ATTTTGGTCA TGAGATTATC AAAAAGGATC TTCACCTAGA TCCTTTTAAA
2341 TTAAAAATGA AGTTTTAAAT CAATCTAAAG TATATATGAG TAAACTTGGT CTGACAGTTA
2401 CCAATGCTTA ATCAGTGAGG CACCTATCTC AGCGATCTGT CTATTTCGTT CATCCATAGT
2461 TGCCTGACTC CCCGTCGTGT AGATAACTAC GATACGGGAG GGCTTACCAT CTGGCCCCAG
2521 TGCTGCAATG ATACCGCGAG ACCCACGCTC ACCGGCTCCA GATTTATCAG CAATAAACCA
2581 GCCAGCCGGA AGGGCCGAGC GCAGAAGTGG TCCTGCAACT TTATCCGCCT CCATCCAGTC
2641 TATTAATTGT TGCCGGGAAG CTAGAGTAAG TAGTTCGCCA GTTAATAGTT TGCGCAACGT
2701 TGTTGCCATT GCTACAGGCA TCGTGGTGTC ACGCTCGTCG TTTGGTATGG CTTCATTCAG
2761 CTCCGGTTCC CAACGATCAA GGCGAGTTAC ATGATCCCCC ATGTTGTGCA AAAAAGCGGT
2821 TAGCTCCTTC GGTCCTCCGA TCGTTGTCAG AAGTAAGTTG GCCGCAGTGT TATCACTCAT
2881 GGTTATGGCA GCACTGCATA ATTCTCTTAC TGTCATGCCA TCCGTAAGAT GCTTTTCTGT
2941 GACTGGTGAG TACTCAACCA AGTCATTCTG AGAATAGTGT ATGCGGCGAC CGAGTTGCTC
3001 TTGCCCGGCG TCAATACGGG ATAATACCGC GCCACATAGC AGAACTTTAA AAGTGCTCAT
3061 CATTGGAAAA CGTTCTTCGG GGCGAAAACT CTCAAGGATC TTACCGCTGT TGAGATCCAG
3121 TTCGATGTAA CCCACTCGTG CACCCAACTG ATCTTCAGCA TCTTTTACTT TCACCAGCGT
3181 TTCTGGGTGA GCAAAAACAG GAAGGCAAAA TGCCGCAAAA AAGGGAATAA GGGCGACACG
3241 GAAATGTTGA ATACTCATAC TCTTCCTTTT TCAATATTAT TGAAGCATTT ATCAGGGTTA
3301 TTGTCTCATG AGCGGATACA TATTTGAATG TATTTAGAAA AATAAACAAA TAGGGGTTCC
3361 GCGCACATTT CCCCGAAAAG TGCCACCTGA CGTCTAAGAA ACCATTATTA TCATGACATT
3421 AACCTATAAA AATAGGCGTA TCACGAGGCC CTTTCGTCTT CAC
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文献和实验反应过夜。 3. 反应完毕后取5mL pQE-31质粒的酶切液做电泳分析,检验酶切是否完全。酶切完全,进行下一步。 4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶纯化试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。 5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与酶切后回收的CAT片段混合,做连接;另一份不加CAT片段,做对照。操作如下:
蛋白为44KD,融合后应为73KD,但是没有见到表达. 综合分析会是什么原因?该蛋白国外已在pQE30载体上表达成功,应该不会是稀有密码的原因造成表达终止吧?第1号和3号克隆已测序,表达框没有移码,基因全长正确。测序结果如下,请参考: AAATCGGATCTGGTTCCGCGTGGATCCCCGGAATTCCCGGGTCGACATGATACAAGTACTGATGGCTGCTGCAAGCTTTG
8.0) PCI (25:24:1) RNase A (1 mg/mL) 1% agarose gel 方法步骤: 1) 由前一天转形所得的转形株中,挑选12~24 个单一菌落,在LB/Amp plate上划数道短的横线或斜线,同时也须要接种带有载体pQE31 的菌株,于37℃培养过夜或直至菌体长出。 2) 以接种环将菌体刮下,悬浊在30 μL 1×NET 中,震荡混合均匀。 ◆ 不要忘了pQE31/JM109! 3) 加入30 μL PCI,剧烈震荡。 4) 以12,000 rpm 离心
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