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文献和实验(颜色变白的哦),并用钳子固定。5. 解开右心耳,同时开启灌注泵。注意,不要随便揭开心脏的其他部位,否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功,尤其肺水肿。6. 将 4 度的生理盐水(最好已动物的肝脏发白为标准,我们实验室的大鼠约用 250ml)和多聚甲醛(根据所取得材料而定)依次灌入。7. 整个过程均应将动物放在冰上,以便于最大程度的保存目的蛋白和酶的活性。
a.根据需要处理样本容量的大小选择合适的量程,移液器最大量程的30%—100 % 是较佳的使用范;不要用小量程的移液器移取大体积的液体,以免影响准确度;同时,如果需要移取量程范围以外较大量的液体, 例如大于10ML以上的液体,建议使用瓶口分液器或大容量移液器工具, 如DispensMate瓶口分液器Levo Plus/Levo Me电动大容量。 b.根据样本的性质选择不同的移液工具,空气体活塞式移液器适用常规水性溶液; 而外置活塞式移液器适用于高蒸气压、高粘度、易挥发、易气泡的液体。
,弃大部分上清剩余400 μl 并转移到1.5 ml Eppendorf管中。 4. 固定。加入500 μl 2×MRWB(新鲜配制)和100 μl 20%多聚甲醛到含有溶解于1×PBS的400 μl 样品的管中。轻柔的颠倒管混匀溶液,室温下固定30分钟,同时在EppendorfThermomixer混合器上轻柔的摇晃(x1000 rpm)(每5~8分钟颠倒管无需摇晃)。 5. 使用1 ml Tris-Cl缓冲液冲洗二次(100 mM,pH7.4)。在这二次冲洗之间,台式
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