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上海瑶韵生物
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文献和实验免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)悬浮细胞:1)收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 lg/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充
,不要把胶溶液溢到外面。在桌面上静置10~20分钟待胶完全凝固。(剩下的胶溶液封口后留待以后再熔化使用)。 (5)在水平电泳槽中加满1´TAE电泳缓冲液。根据电泳槽的长度把电泳仪的电压调至170V(10V/cm),注意正负电极的位置连接正确。 (6)待胶完全凝固后(15~20分钟),小心拔出梳子。用手指捏住模具两侧的高边缘取出模具和凝胶放入电泳槽中间的平台上,凝胶要没入电泳液中。凝胶上有样品孔的一侧要朝向电泳槽的负极。 (7)剪1片光面纸(或封口膜),点6µl蒸馏水、1µl 10´加样缓冲
EDTA pH8.0);溶液II(0.2mol/L NaOH,1% SDS);溶液III(60ml 5mol/L Kac,加冰乙酸调pH4.8,补dd H2O至100ml),75%乙醇(-20°C保存),TE buffer(10mmol/L Tris HCl pH8.0,1mmol/L EDTA pH8.0);10mg /ml RNase A(RNA酶A溶于10mmol/L Tris HCl pH7.5,15mmol/L NaCl中);摇菌试管洗净并盖上棉塞、1.5ml离心管装入铝制饭盒、移液器吸头
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