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ApoBrdU Red DNA Fragmentation Kit
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文献和实验7.5. Prepare the working dilution of the primary antibody in 1.0% crystalline-grade Bovine Serum Album (BSA) in 1x PBS. Use BrdU antibody (Dako Catalog No. M744) at 1:20 dilution. Blot off PBS and apply 150µl of working dilution. Incubate sections
的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
0-G1期峰的一个峰,死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远,但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法,完全可以不用这种方法。晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂,因而可以出现DNA ladder,从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测,其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例,其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端,从而使凋亡的细胞具有荧光。但是由于在细胞内标记,细胞需要进行固定处理,操作类似免疫组织化学法,容易造成假阳性。建议采用原装大厂
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