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- P6025
- 2025年08月13日
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大量
- 英文名：
CDK2-cyclin A
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货号#
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规格
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价格
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库存
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#P6025S
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2,000 units
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1,379.00 元
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有
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#P6025L
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10,000 units
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5,549.00 元
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无
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♦蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶 ♦人源，重组蛋白(S.frugiperda Sf9) |
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概述
CDK2-cyclinA是细胞周期蛋白依赖性激酶家族中的一个成员，能调控真核细胞周期。细胞周期中的每一个时期表达不同的细胞周期蛋白依赖性激酶复合物，来磷酸化并且调控下游底物。 CDK2- cyclinA是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由催化亚基CDK 2和其正调控亚基- 细胞周期蛋白A (cyclinA) 组成。CDK2需要与细胞周期蛋白结合才有活性，并且CDK2的激活还需要在160位上的苏氨酸磷酸化，这一步是在CDK活化激酶(CDK activating k i n a s e CAK) 作用下完成的。在脊椎动物中中，CDK2-cyclin A复合物在细胞周期的S期具有活性(1)。 |
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影响识别因素
像其他细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs)一样，CDK2底物的最佳识别序列为S/TPXR/K，必须要有+1位脯氨酸，和+3位正电荷残基。以上数据是以磷酸化标准多肽底物而获得的。但是，磷酸化人工标准多肽底物和体内生理性蛋白底物会有不同，因此CDK2-cyclin和其他CDK的特异性也会随体内、体外而改变。被称为Cy功能域的cyclin结合功能域含有共同序列RXL。已经确认，CDK2-cyclin A和E的一些生理性底物中均含此功能域。该功能域位于磷酸化作用位点的C端对底物识别非常重要，是不同细胞周期蛋白的特异性决定因子(2)。
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来源
在160位上的苏氨酸磷酸化的CDK2是在重组大肠杆菌中表达的。人GST-CDK2(亚型1)和酿酒酵母(S.cerevisiae)GST-Cak1共同表达，纯化后的蛋白质不含GST-tag。突变了N173M的人细胞周期蛋白A(173-432)也是在大肠杆菌中表达的，并且纯化后也不含tag。所有蛋白编码序列都是在T7表达系统的控制下克隆的(Dr. D. Barford惠赠)(3)。
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反应条件
1X CDK2-cyclin A反应缓冲液[50 mM Tris-HCl, (pH 7.5 @25°C), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT和0.01 % Brij 35]，加入200 μM ATP和终比活性为100-和500μCi/μmol的γ-放射性标记的ATP，30°C温育。
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反应缓冲液(随酶提供)
10X CDK2-cyclin A反应缓冲液
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比活性
~10,000,000 units/mg。
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质保声明
无蛋白酶和磷酸酶活性。
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分子量
CDK2 (34 kDa)，cyclin A (29 kDa)。
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单位定义
1单位指30 μl反应体系中，30°C条件下，1分钟内催化1 pmol 磷酸转移至组蛋白H1 (10 μM)上所需的CDK2-cyclin A的酶量。
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浓度
100,000 units/ml。
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保存条件
100 mM NaCl, 50 mM HEPES (pH 7.5 @25°C), 0.1 mM Na2EDTA,1 mM DTT, 0.01% Brij和50％甘油。保存于-70°C，避免反复冻融。
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CDK2细胞周期蛋白A CDK2-cyclin A
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