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- P6025
- 2025年08月13日
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大量
- 英文名：
CDK2-cyclin A
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货号#
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规格
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价格
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库存
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#P6025S
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2,000 units
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1,379.00 元
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有
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#P6025L
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10,000 units
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5,549.00 元
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无
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相关产品 三磷酸腺苷 (ATP) #P0756S 1 ml ¥ 319.00 #P0756L 5 ml ¥ 1,269.00 |
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♦蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶 ♦人源，重组蛋白(S.frugiperda Sf9) |
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概述
CDK2-cyclinA是细胞周期蛋白依赖性激酶家族中的一个成员，能调控真核细胞周期。细胞周期中的每一个时期表达不同的细胞周期蛋白依赖性激酶复合物，来磷酸化并且调控下游底物。 CDK2- cyclinA是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，由催化亚基CDK 2和其正调控亚基- 细胞周期蛋白A (cyclinA) 组成。CDK2需要与细胞周期蛋白结合才有活性，并且CDK2的激活还需要在160位上的苏氨酸磷酸化，这一步是在CDK活化激酶(CDK activating k i n a s e CAK) 作用下完成的。在脊椎动物中中，CDK2-cyclin A复合物在细胞周期的S期具有活性(1)。 |
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影响识别因素
像其他细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs)一样，CDK2底物的最佳识别序列为S/TPXR/K，必须要有+1位脯氨酸，和+3位正电荷残基。以上数据是以磷酸化标准多肽底物而获得的。但是，磷酸化人工标准多肽底物和体内生理性蛋白底物会有不同，因此CDK2-cyclin和其他CDK的特异性也会随体内、体外而改变。被称为Cy功能域的cyclin结合功能域含有共同序列RXL。已经确认，CDK2-cyclin A和E的一些生理性底物中均含此功能域。该功能域位于磷酸化作用位点的C端对底物识别非常重要，是不同细胞周期蛋白的特异性决定因子(2)。
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来源
在160位上的苏氨酸磷酸化的CDK2是在重组大肠杆菌中表达的。人GST-CDK2(亚型1)和酿酒酵母(S.cerevisiae)GST-Cak1共同表达，纯化后的蛋白质不含GST-tag。突变了N173M的人细胞周期蛋白A(173-432)也是在大肠杆菌中表达的，并且纯化后也不含tag。所有蛋白编码序列都是在T7表达系统的控制下克隆的(Dr. D. Barford惠赠)(3)。
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反应条件
1X CDK2-cyclin A反应缓冲液[50 mM Tris-HCl, (pH 7.5 @25°C), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT和0.01 % Brij 35]，加入200 μM ATP和终比活性为100-和500μCi/μmol的γ-放射性标记的ATP，30°C温育。
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反应缓冲液(随酶提供)
10X CDK2-cyclin A反应缓冲液
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比活性
~10,000,000 units/mg。
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质保声明
无蛋白酶和磷酸酶活性。
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分子量
CDK2 (34 kDa)，cyclin A (29 kDa)。
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单位定义
1单位指30 μl反应体系中，30°C条件下，1分钟内催化1 pmol 磷酸转移至组蛋白H1 (10 μM)上所需的CDK2-cyclin A的酶量。
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浓度
100,000 units/ml。
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保存条件
100 mM NaCl, 50 mM HEPES (pH 7.5 @25°C), 0.1 mM Na2EDTA,1 mM DTT, 0.01% Brij和50％甘油。保存于-70°C，避免反复冻融。
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文献和实验3 篇 Nature 连发，解决世纪难题，周期蛋白的毁灭调控蕴含癌症患者的新生
在 cyclin D 上，被泛素化标记的 cyclin D 将会被蛋白酶体降解。此外研究还发现，AMBRA1 缺失会导致 cyclin D 和 MYC 蛋白水平升高。cyclin D 与 CDK4/6 结合，使 RB1 蛋白磷酸化。磷酸化 RB1 释放 E2F 转录因子来驱动细胞周期进程所需基因的表达。在 AMBRA1 缺失的细胞中，cyclin D 也能与 CDK2 激酶形成复合物，使癌细胞能够抵抗 CDK4/6 抑制剂的治疗。高水平的 cyclin D 会促进细胞增殖，从而导致 DNA 损伤、复制应激
趣味研究 | Nature：胸小的原因找到了，原来是.....
图 2 就是说明雷帕霉素加入后，乳腺重新发育。图 2 中 的 a 可以明显看到 p-S6 表达增加。那么这个激活的 mTORC1 是如何影响的呢？图 3图 4图 5原来是雷帕霉素加入后可逆转磷酸化的 PDK1（图 3）、AKT（图 3）、nuclear ERα（图 4 ）、nuclear IRS-1（图 4）、SGK3（图 4）、 细胞周期蛋白（图 5）如 Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4 和他们下游的 Prb。看到这里，我的内心是崩溃的，有这么多的蛋白和乳腺
于细胞周期依赖性激酶（CDK），该酶只有与细胞周期素（cyclins）结合才有活性，可促进细胞周期中G1→S和G2→M的转变。在细胞周期素中最有意义的是细胞周期蛋白D（cyclin D），它能激活CDK2、4、5，促进细胞由G1期进入S期，进行DNA合成。 目前认为p53、p16、Rb基因与G1-S调节点有关。p53基因的表达产物p53蛋白的作用机制主要是间接作用于细胞周期，p53可促进P21蛋白（CDK2的抑制剂）的表达，从而在细胞周期中抑制G1期至S期的转换，阻碍细胞进入DNA合成期
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