Apo-BrdU-IHCT DNA断裂检测试剂盒（双色免疫组

TUNEL 检测细胞凋亡原则及经验总结

的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应

流式细胞仪检测细胞凋亡

0-G1期峰的一个峰，死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远，但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法，完全可以不用这种方法。晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测，其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例，其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。但是由于在细胞内标记，细胞需要进行固定处理，操作类似免疫组织化学法，容易造成假阳性。建议采用原装大厂

关于细胞凋亡的讨论

性，也不宜计算凋亡率。 琼脂糖凝胶电泳可以比较不同组别的凋亡程度，但不能得出凋亡率。 TUNEL法太敏感，有DNA断裂的细胞应该都能着色，所以很多人做出的结果不是绝大部分阳性就是全部不着色（可能试剂问题或实验操作问题）。 PI单染色法流式分析：多用于检测细胞周期分布。早期凋亡细胞也可以检测到，表现为亚二倍体峰。 我觉得检测凋亡率最好的方法还是Annexin-V-FITC/PI双染色、流式细胞仪分析法，可以得出明确的凋亡率，并区分坏死细胞，其原理是：在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变，细胞