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GCN5组蛋白乙酰转移酶（GCN5-HAT）活性荧光定量检测

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  • ￥6000
  • 赫澎生物
  • 上海
  • HPBIO-JM11104
  • 2025年11月07日
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      干燥密封保存

    • 供应商：

      赫澎（上海）生物

    • 规格：

      20次

    核小体（nucleosome）是染色质的小结构单位，由组蛋白H2A-H2B双体和H3-H4双体构成的组蛋白八体结构（octamer），外层涵盖146碱基DNA。其结构中组蛋白N末端为游离状态，且高度进化保留，在特定氨基酸部位发生诸如甲基化、乙酰化、磷酸化修饰，以改变其电荷和功能。组蛋白上特定赖氨酸残基的ε氨基基团的乙酰化通过组蛋白乙酰转移酶（Histone Acetyltransferase；HAT；EC2.3.1.48）催化产生，具有表观遗传学的调节作用，达到染色体重构（remodeling），染色质松弛打开，促使基因转录。其功能异常将导致肿瘤、神经退行性疾病、AIDS和炎症。组蛋白乙酰转移酶，又称为赖氨酸乙酰转移酶（lysine acetyltransferase）；KAT），分成二型，细胞核内的A型，包括P300/CBP、Gcn5、TAFII250等，和细胞浆内的B型，例如Hat1。其又分成六类：P300/CBP（P300/cAMP Responsive Element-Binding Protein），包括P300、CBP等；GNAT（Gcn5-related N-acetyltransferase），包括Gcn5、PCAF、Hat1、Elp3、Hpa2、Hpa3、ATF-2、Nut1等；MYST（MOZ、ybf2/sas3、sas2、Tip60），还包括Esa1、MOF、MORF、HBO1等；核受体共激活因子（nuclear receptor co-activator），包括SRC-1、SRC-3、ACTR、TIF2；TAFII250（TATA box binding protein associated factor）；TFIIIC（transcriptional factor IIIC）等。其中GCN5（氨基酸合成总控制蛋白5；general control of amino acid synthesis protein 5），又称为KAT2A（赖氨酸乙酰转移酶2A；lysine acetyltransferase 2A），进化高度保留，为转录共激活因子，调节染色体结构，促进GCN5依赖性的大转录水平和基因表达，包括能量代谢、应激反应、细胞毒性和死亡。催化转移乙酰辅酶A上的乙酰基团到组蛋白H3或非组蛋白（例如CEBPB）的赖氨酸残基上。酵母GCN5有2个关联复合体：SAGA和Ada，均乙酰化核小体组蛋白H3和H2B。 真菌GCN5主要调节植物真菌病原性中自噬的向光性或饥饿性诱导和无性孢子形成，与真菌毒力相关。GCN5异常，会导致早期胚胎死亡、肿瘤和糖尿病等。基于底物H3组蛋白多肽Ac-Gln-Thr-Ala-Arg-Lys-Ser-Thr-Gly-Gly-Lys- Ala- Pro-Arg-Lys-Gln-Leu-Ala-Thr- Lys-NH2 （H3组蛋白N末端5至23氨基酸残基），在GCN5敏感性抑制剂丁内酯 3 （Butyrolactone 3）存在与否的情况下，通过GCN5的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到多肽分子上，由此产生乙酰化多肽和巯基辅酶A（CoA-SH），与Ellman试剂5，5-二硫基-双（2-基苯甲酸）[5，5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量测定GCN5组蛋白乙酰转移酶的特异活性。其反应系统为：


    产品内容

    HEPENGBIO裂解液（Reagent A） 毫升
    HEPENGBIO分离液（Reagent B） 毫升
    HEPENGBIO清理液（Reagent C） 毫升
    HEPENGBIO萃取液（Reagent D） 毫升
    HEPENGBIO缓冲液（Reagent E） 毫升
    HEPENGBIO反应液（Reagent F） 微升
    HEPENGBIO底物液（Reagent G） 毫升
    HEPENGBIO显色液（Reagent H） 毫升
    HEPENGBIO专性液（Reagent I） 微升
    产品说明书 1份

    保存方式

    保存HEPENGBIO反应液（Reagent F）、HEPENGBIO底物液（Reagent G）、HEPENGBIO显色液（Reagent H）和HEPENGBIO专性液（Reagent I）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO显色液（Reagent H）避免光照，有效保证6月

    用户自备

    磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗细胞样品
    15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
    1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
    细胞刮脱棒：用于细胞脱离
    （微型）台式离心机：用于细胞预处理
    96孔板或200微升1厘米光径比色皿：用于反应和光度分析的容器
    酶标仪或分光光度仪：用于光度分析

    实验步骤

    实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。

    一、样品准备
    1. 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
    2. 小心抽去培养液
    3. 小心加入10毫升用户自备的磷酸盐缓冲溶液（PBS），覆盖生长表面
    4. 小心抽去清理液
    5. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
    6. 加入xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent A），混匀细胞
    7. 移入到预冷的15毫升锥形离心管
    8. 强力涡旋震荡10秒
    9. 置于冰槽里孵育15分钟
    10. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO分离液（Reagent B），混匀
    11. 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1300g
    12. 小心抽去上清液
    13. 加入

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    • 组蛋白修饰的类型

      化的平衡失调与肿瘤发生和癌症进展有关。 酶调节  乙酰基被组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 添加到组蛋白 H3 和 H4 的赖氨酸残基上，并被去乙酰化酶 (HDAC) 除去。组蛋白乙酰化主要靶向启动子区域，称为启动子局部乙酰化。例如，组蛋白 H3（H3K9ac 和 H3K27ac）上 K9 和 K27 的乙酰化通常与活性基因的增强子和启动子有关。转录基因中也发现了 低水平的整体乙酰化，但其功能尚不清楚。 ​ 甲基化  ​组蛋白 H3 和 H4 的赖氨酸或精氨酸残基被甲基化，对转录有不同的影响。精氨酸甲基

    • 具有HAT活性的转录共激活因子

      具有 HAT 活性的转录共激活因子 位于组蛋白附近具有HAT活性的激活因子可降低染色体结构的稳定性。酵母和四膜虫HAT的实验证明，组蛋白乙酰化在转录激活过程中起作用。酵母HATs(SAGA、NuA4、NuA3、Ada)和四膜虫NuA4可促进体外核小体转录。HAT的刺激转录作用只有在乙酰辅酶A存在时才可观察到。HAT通过几种机制刺激基因转录，由结合启动子的激活因子募集的HAT可导致局部组蛋白的乙酰化，而由增强子或局部控制区的激活因子募集的HAT可导致大范围的乙酰化。实验

    • 熬夜不睡，免疫崩溃！长期睡眠不足会增加炎症疾病风险，即使补觉也难以逆转

      。随后，研究人员测量了提取的 HSPCs 中的组蛋白乙酰转移酶（HAT）和 HDAC 活性，发现睡眠限制倾向于增加 HAT 和 HDAC 活性，这降低了组蛋白 H3 乙酰化，表明睡眠塑造了人类 HSPCs 的表观基因组。 此外，在经历睡眠限制的参与者血液中提取的 HSPCs 中 CD115 和 CD123 的表达增强，这是 HSPCs 分化为髓系细胞的信号。 以上这些结果表明，人的睡眠调节造血，塑造造血干细胞的表观基因组并促进其向髓系细胞分化。 图片来源：Journal

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