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赫澎(上海)生物
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文献和实验华之风问:请教园里战友,本人拟用siRNA转染做平滑肌细胞,观察基因沉默后效果的,但是我们实验室环境不太好,细胞培养容易污染,想加双抗,但不知道加双抗对基因转染沉默有无影响,谢谢!丁香园网友hainblue认为:有影响的,以前用脂质体转染的时候,说明书上说的是转染时不要用含有抗生素的培养基。他的解释是可能引起细胞死亡。具体怎么样就不知道了,比较试剂很贵,没钱作者方面的尝试。丁香园网友laugh认为:大多数不可以,因为增加了细胞通透性,抗生素的进入会增加细胞的死亡,但Qiagen
shRNAs(short hairpin RNAs)在哺乳动物细胞中引发的基因沉默
(double-stranded RNA)诱导的基因沉默广泛存在于各种物种当中,包括植物、真菌、昆虫、原生动物以及真核生物等[1] 。通过研究小片段干扰RNAs(siRNAs)和表达后的shRNAs在哺乳动物细胞中的作用,研究人员发现人或鼠基因组的任何基因都能成为dsRNAs诱导基因沉默的靶向基因。因此,RNAi很快成为哺乳动物细胞体系研究的标准实验技术。 我们和其他一些实验室构建了用于哺乳动物细胞产生小片段dsRNA的体内表达载体,类似于内源表达的hairpin RNAs[2]。在试验中
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
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