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组织沉默调节蛋白1 (SIRT1)活性比色法定量检测试剂盒

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  • ¥5500
  • 赫澎生物
  • 上海
  • HPBIO-JM67-46
  • 2025年11月06日
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      赫澎(上海)生物

    • 规格

      20次

    人体组蛋白脱乙酰基酶histone deacetylaseHDAC)家属分成三类共20多个蛋白:种类Iclass I)与酵母Rpd3蛋白同源,包括HDAC1238,存在于细胞核中;种类IIclass II)与酵母Hda1蛋白同源,包括HDAC45679a9b10HDRP/MITR,存在于细胞核和细胞浆里;上述种类的蛋白分子催化结构域含有锌,且曲古菌素A(trichostatin ATSA)敏感。种类IIIclass III)为NAD+辅助因子必需,又称为sirtuins,与酵母Sir2Silent Information Regulator 2)同源,包括SIRT17等,为曲古菌素Atrichostatin ATSA)不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶(lysyl-deacetylase。催化赖氨酸脱乙酰基反应,以及由NAD+乙酰(acetyl基团转化产生的烟酰胺nicotinamideO-乙酰ADP核糖(O-acetyl-ADP-riboseSIRT1位于细胞核内,与酵母Sir2同源性zui高。其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53(379至382氨基酸位点)多肽底物Ac-ArgHis-Lys-Lys(Ac具有抗氨基肽酶切离的功能,首先使用比色染料对xiao基苯胺(p-Nitroaniline;p-NA)来标记乙酰化p53多肽底物,其次进行脱乙酰化,zui后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解,释放出具有强烈吸光值的黄色对xiao基苯胺(波长405nm),由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。其反应系统为:

    产品内容

    HEPENGBIO裂解液(Reagent A) 毫升
    HEPENGBIO分离液(Reagent B) 毫升
    HEPENGBIO清理液(Reagent C) 毫升
    HEPENGBIO萃取液(Reagent D) 毫升
    HEPENGBIO缓冲液(Reagent E) 毫升
    HEPENGBIO底物液(Reagent F) 微升
    HEPENGBIO终止液(Reagent G) 微升
    HEPENGBIO酶解液(Reagent H) 微升
    HEPENGBIO补充液Reagent I 微升
    产品说明书 1份
    保存方式

    保存HEPENGBIO缓冲液(Reagent E)、HEPENGBIO底物液(Reagent F)、HEPENGBIO终止液(Reagent G)HEPENGBIO酶解液(Reagent H)在-20冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4冰箱里;HEPENGBIO底物液(Reagent D)避免光照,有效保证6

    用户自备

    磷酸盐缓冲溶液(PBS):用于清洗组织样品
    15毫升锥形离心管:用于样品处理的容器
    1.5毫升离心管:用于样品操作和保存的容器
    (微型)台式离心机:用于组织细胞预处理
    培养箱:用于反应物孵育
    酶标板或比色皿:用于反应和比色的容器
    酶标仪或分光光度仪:用于比色分析

    实验步骤

    实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。

    一、样品准备
    1. 手术取出动物组织,并秤重以确定500毫克组织重量
    2. (选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
    3. (选择步骤)加入xx毫升用户自备的磷酸盐缓冲溶液(PBS清洗1次
    4. 移入到一个液氮冻存管
    5. 即刻放进液氮罐过夜
    6. 次日从液氮罐里取出,即刻(zui快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融
    7. 放进一个15毫升锥形离心管
    8. 加入xx毫升HEPENGBIO裂解液(Reagent A,混匀细胞
    9. 移入到预冷的15毫升锥形离心管
    10. 强力涡旋震荡10
    11. 置于冰槽里孵育15分钟
    12. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO分离液(Reagent B,混匀
    13. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1300g
    14. 小心抽去上清液
    15. 加入xx毫升预冷的HEPENGBIO清理液(Reagent C
    16. 放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为1300g
    17. 小心抽去上清液
    18. 小心加入xx微升预冷的HEPENGBIO萃取液(Reagent D,混匀
    19. 转移到新的预冷的1.5毫升离心管
    20. 超声处理30
    21. 置于冰槽里孵育30分钟
    22. 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如EPPENDORF 5415
    23. 小心移取上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
    24. 移取10

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    • 酶类生化试剂盒注意事项

      计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测

    • 组蛋白修饰的类型

      于该检测试剂盒对目标修饰的特异性)  测定广泛物种(包括哺乳动物细胞/组织、植物和细菌)的去甲基化酶活性  具有简单比色或荧光读数的快速微孔板版本  3 小时内即可提供数据  表征组蛋白乙酰化通路  提供可分析总体活性以及 H4 特异性的 HAT 活性的试剂盒。这些检测试剂盒可以检测 HAT 催化乙酰基从乙酰辅酶 a 供体转移到组蛋白肽的过程,该过程会生成乙酰化肽和 CoA-SH。然后通过 比色法或荧光法测定 CoA-SH 副产物:  比色法 - CoA-SH 作为生成 NADH

    • ELISA 实验操作要点

      0.2% 时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。 (2) 流水冲洗式:流水冲洗最初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗 2 分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡 2 分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。 6. 显色和比色

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