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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷冻保存
- 供应商:
赫澎(上海)生物
- 规格:
50次
产品内容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO固着液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO染色液(Reagent C) 微升
HEPENGBIO稀释液(Reagent D) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于反应液配制和样品操作的容器
微型台式离心机:用于悬浮细胞的操作
荧光显微镜:用于细胞染色后观察分析
实验步骤
实验开始前,将试剂盒里的HEPENGBIO染色液(Reagent C)冻融,然后移出xx毫升HEPENGBIO稀释液(Reagent D)到1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C),混匀后,置入冰槽里,标记为HEPENGBIO染色工作液,避免光照。然后进行下列操作。
操作一:细胞载玻片染色
- 取出待测的细胞载玻片
- 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO固着液(Reagent B),铺满整个样品表面
- 室温下,孵育5分钟
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO固着液(Reagent B)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗样品表面
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO染色工作液,铺满整个载玻片样品表面
- 室温下孵育10分钟,避免光照
- 放上盖玻片
- 即刻在荧光显微镜下观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
操作二:24孔细胞培养板染色
- 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
- 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面
- 小心抽去HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO固着液(Reagent B),覆盖整个生长表面
- 在室温下孵育5分钟
- 小心抽去HEPENGBIO固着液(Reagent B)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗细胞表面
- 小心抽去HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO染色工作液,覆盖整个生长表面
- 室温下静孵育10分钟,避免光照
- 即刻在荧光显微镜下观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
操作三:悬浮细胞或脱离细胞染色
- 将悬浮细胞或脱离细胞(1 X 106细胞)移入到1.5毫升离心管
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
- 小心抽去上清液
- 加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
- 小心抽去上清液
- 加入xx微升HEPENGBIO染色工作液,混匀细胞颗粒群
- 室温下孵育10分钟,避免光照
- 移出50微升到载玻片上,放上盖玻片
- 即刻在荧光显微镜下进行观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
注意事项
- 本产品为50次(细胞载玻片)和25次(1个24孔板)操作
- 操作时,须戴手套
- 所有操作在室温下进行
- 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:
| 操作容器 | 建议操作体系 |
| 载玻片 | 200微升 |
| 载玻片培养皿 | 1毫升 |
| 35mm培养皿 | 1毫升 |
| 96孔培养板 | 100微升 |
| 48孔培养板 | 200微升 |
| 24孔培养板 | 400微升 |
| 12孔培养板 | 1毫升 |
| 6孔培养板 | 2毫升 |
| 25cm2细胞培养瓶 | 3毫升 |
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磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(propidine iodide
技术资料暂无技术资料 索取技术资料







