- ￥980
- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JC10
- 2025年11月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干燥密封保存
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
分光光度法 50管/48样 980元 微量法100管96样 1680
苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
PAL（EC4.3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。
测定原理
PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。
所需的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入4mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂三：液体 1mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。
2、在EP管或96孔板中按顺序加入下列试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 5 | |
| 试剂一 | 145 | 150 |
| 试剂二 | 40 | 40 |
| 混匀，30℃ 准确反应 30min | ||
| 试剂三 | 10 | 10 |
注意：对照管只要做一管
PAL 活性计算
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1） 按蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.1÷T =13.3×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。
PAL（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.005mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
用96孔板测定的计算公式如下
（1） 按蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活性单位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.05÷T =26.6×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.05为一个酶活性单位。
PAL（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL； V 样：加入样本体积，0.005mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
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文献和实验相关专题一、原理 苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonialyase，PAL）催化苯丙氨酸的脱氨反应，使NH3释放出来形成反式肉桂酸。此酶的在植物 体内次生物质（如木质素等）代谢中起重要作用。根据其产物，反式肉桂酸在290nm处吸光度的变化可以测定该酶的活性。 二、材料、仪器设备 及试剂 （一）材料：马铃薯块茎 （二）仪器设备：1. 紫外分光光度计 ；2. 离心机；3. 研钵；4. 吸滤瓶；5. 红光装置；6. 打孔器。 （三）试剂
L-苯丙氨酸解氨酶L－phenylalanin ammo－nialyase
缩写 PAL。是催化直接脱掉 L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。 EC． 4． 3． 1． 5。是 1961年 J． Koukol， E． Conn在大麦中发现的。存在于高等植物、酵母、菌类的可溶性部分。推测分子量为 30万。这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。在很多情况下，其反应成为酚类化合物合成的有步骤的速率阶段。在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照，病伤害，植物激素处理等会使活性显著增加。另外有时还受光敏色素所支配。在多数情况下，在组织中活性
苯环连有三个直链碳的苯基丙烷骨架（C6 — C— C— C）所构成的天然有机化合物之总称。多数是以植物代谢产物而被发现的。在高等植物体内，主要是靠由苯丙氨酸解氨酶形成的桂皮酸合成其衍生物，进而再合成香豆素类等各种类苯基丙烷，木聚糖是苯基丙烷骨架的二聚体，木质素是由许多木聚糖不规则地聚合成的高分子化合物。类苯基丙烷也作为缩酚酸类（ depside，如绿原酸等）和配糖体广泛分布于植物组织中。
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