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赫澎(上海)生物
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赫澎生物坐落在金山区,。产品均为备货产品,下午2点之前的订单都可以发出。
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文献和实验方法? 石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。 常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。 免疫组化常用的染色方法有哪些? 根据标记物的不同,无非就三种,即免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法
染色通常需要样品制备、抗原修复、封闭、目的抗原检测等操作。IHC 实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案。下图为 IHC 的实验操作步骤。 图 4 IHC操作步骤 免疫组化样本固定多使用甲醛进行固定,通过形成亚甲基桥而将蛋白交联起来,掩盖掉抗原位点,从而影响抗原-抗体的结合。抗原修复则会破坏这些亚甲基桥,暴露出抗原位点,使抗体能够与之结合。用于抗原修复的两种方法分别为热诱导表位修复法和酶修复法。 表 3 抗原修复方式分类 图 5 免疫组化实验检测 Phospho-Akt 表达 注
一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
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