- ￥3960
- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JM3160
- 2025年11月16日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干燥密封保存
- 库存：
现货
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
1次
产品内容
HEPENGBIO透析液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO透析袋 个
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里， 避免光照，有效保证3月
用户自备
2升烧杯：用于样品保存的容器
4℃冰箱：用于反应孵育
实验步骤
- 准备好可溶性纯化变性蛋白样品
- （选择步骤）加入适量的HEPENGBIO透析液（Reagent A）调整蛋白浓度到1毫克/毫升
- 移取xx毫升蛋白样品到HEPENGBIO透析袋或自备透析袋（注意：封闭，没有渗漏）
- 放入2升烧杯中
- 加入xx毫升HEPENGBIO透析液（Reagent A）
- 放进4℃环境中，磁力搅拌16小时（注意：4小时后可以更换一次透析液）
- 收集样品（注意：用户可以使用新鲜的HEPENGBIO透析液（Reagent A）或自备蛋白稀释液进行稀释处理）
- （选择步骤）移取100微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值
- 即刻放进－70℃冰箱里保存
注意事项
- 本产品为1次（10毫升样品）操作
- 操作时须戴手套
- 本产品的复性效率达80％
- 建议与本公司系列包涵体蛋白溶解试剂盒配套使用
- HEPENGBIO透析袋使用前，置于60℃无离子水浸泡10分钟后，方可使用
- 如果蛋白样品在室温下较为稳定，且活性不受影响，可以使用室温下透析处理，效果（产率和可溶性）更佳
- 由于样品的特异性，用户可以优化温度（4度或室温）、孵育时间（4小时至16小时）、蛋白容量（5至15毫升），以获得大复性效率
- 透析袋为3.5Kd临界值
- 本公司提供系列包涵体蛋白处理试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定无蛋白酶污染
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验包涵体复性常见问题分析 1. 对于尿素和盐酸胍该怎么选择? 尿素和盐酸胍属中强度变性剂，易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用，所需浓度尿素8-10M，盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱，溶解度为70-90%，尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，对重组蛋白质的氨基进行共价修饰，但用尿素溶解具有不电离，呈中性，成本低，蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点，故目前已被广泛采用。 盐酸胍溶解能力达95
的完全伸展状态恢复到正常的折叠结构，同时去除还原剂使二硫键正常形成。一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始，到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言，可以从4M开始，到1.5M 时复性过程已经结束。 2.1包涵体蛋白复性方法 2.1.1稀释复性：直接加入水或缓冲液，放置过夜，缺点是体积增加较大，变性剂稀释速度太快，不易控制。目前稀释法主要有一次稀释、分段稀释和连续稀释三种方式。 2.1.2透析复性：好处是不增加体积，通过逐渐降低外透液浓度来控制变性剂去除速度，有人称易形成无活性蛋白质聚体
液，经离心浓缩后，可用：机械破碎、超声破碎：单纯超声破碎，在小规模下且菌量较少的情况下效果较好，由于能量传递和局部产热等原因，很难用于大体积细胞悬液的破碎，这样部分未破碎细胞与包涵体混在一起，给后期纯化带来困难。因此，在较大规模纯化时先用溶菌酶破碎细菌的细胞膜，再结合超声破碎方法，可显著提高包涵体的纯度和回收率。以及化学方法破碎使细菌裂解 , 然后以 5000-20000g 15min 离心，可使大多数包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。 1.3.2 洗涤：为了除去包涵体上粘附的杂质
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