可溶性包涵体蛋白复性（化学稀释I）试剂盒

在蛋白纯化和融化过程中，特别是包涵体蛋白，变性剂（denaturant）提供了有效的手段，其获得的纯化蛋白属于变性蛋白（denatured protein）。为了使变性蛋白恢复为天然蛋白（native protein），即具有蛋白质的自然结构和活性，需要进行蛋白复性（renaturation）或重新折叠（refolding）。蛋白复性是一个复杂的过程，诸如pH、离子强度、低分子添加剂、氧化还原电位（redox potential）和温度等物化因子，影响体外蛋白复性的效率。通常体外复性的方法包括稀释法和缓冲交换法。前者通过化学处理，而后者采用物理方法（例如透析、膜过滤（diafiltration）、凝胶过滤层析（gel-filtration chromatography）等，以达到蛋白复性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜碱（sulfobetaine）、去垢剂、变性剂等将影响化学稀释复性处理的效率。

产品内容

HEPENGBIO稀释液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO还原液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO平衡液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存在-20℃冰箱里， 避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品保存的容器
恒温摇床：用于反应孵育

实验步骤

方法一：还原复性

1. 准备好可溶性纯化变性蛋白样品
2. 移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管
3. 加入适量的HEPENGBIO稀释液（Reagent A）调整蛋白浓度到10毫克/毫升
4. 移取100微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管
5. 加入xx微升HEPENGBIO还原液（Reagent B）
6. 放进20℃恒温摇床孵育4小时，速度为200RPM
7. （选择步骤）移取10微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值
8. 即刻放进－70℃冰箱里保存

方法二：平衡复性

1．准备好可溶性纯化变性蛋白样品
2．移取适量的蛋白样品到1.5毫升离心管

1. 加入适量的HEPENGBIO稀释液（Reagent A）调整蛋白浓度到5毫克/毫升
2. 移取5微升蛋白样品到新的1.5毫升离心管
3. 加入xx微升HEPENGBIO平衡液（Reagent C）
4. 放进28℃恒温摇床孵育2小时，速度为200RPM
5. （选择步骤）移取10微升进行生物检测，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受体结合实验等确定复性蛋白活性值
6. 即刻放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1. 本产品为5次操作（还原和平衡各5次）
2. 操作时须戴手套
3. 本产品的复性效率达15至30％
4. 建议与本公司系列包涵体蛋白溶解试剂盒配套使用
5. 由于样品的特异性，用户可以优化温度、孵育时间、蛋白浓度，以获得大复性效率
6. 如果复性效率过低，建议使用HEPENGBIO可溶性包涵体蛋白复性（物理透析）试剂盒－HEPENGBIO30044.5
7. 如果获得满意的复性效果，用户可以按比例扩大复性容量
8. 本公司提供系列包涵体蛋白处理试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定无蛋白酶污染