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全基因合成
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【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法
相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题,泡了无数论坛,看了无数帖子,尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间,甚至让别的公司帮忙做密码子优化(将目的片段通过全基因合成的方式合成出来)。总的来说,提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的,但一般也就用到1mM的浓度,再高对细胞有毒性; 培养基营养越丰富,表达量越高,所以如果追求表达量的话,就不要用LB培养基了,用自动诱导培养基吧; 诱导温度,温度越低
上应该有启动子的吧,比如CMV。 那你只需要克隆编码区即可。至于获得方法,你提RNA后,逆转,用PCR即可获得, 当然得测序鉴定。PCR引物两端,根据你的多克隆位点两端的酶切位点,设计相应的内切酶识别序列。 普通的RT酶普遍能逆转6K以上的片段的,你的序列才2Kb,完全没问题。 另外,现在人,小鼠等物种的基因早已经商业化了,去买一个克隆进载体的,也才3K左右,比自己做可能要省下很多金钱和精力。 baby_susan 从实际操作上讲
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