Knockdown(基因敲低)细胞系

RNA干扰是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。现今发现的主要起干扰作用的主要有两类小分子RNA：一类是microRNA；另一类是siRNA。siRNA制备的方法一般有:化学合成siRNA，哺乳动物细胞载体shRNA克隆和慢病毒载体shRNA克隆。shRNA需通过载体导入细胞后，然后利用细胞内的酶切机制得到siRNA而最终发挥 RNA干扰作用。

在细胞水平上，利用RNA干扰技术来抑制目标基因的表达，从而获得knockdown的基因敲低细胞系，已广泛应用于研究基因功能，设计疾病模型和药物研发中。安必奇凭借先进的实验技术，完善的实验平台可以针对各种目标基因设计高效的shRNA，并利用shRNA的慢病毒表达载体，构建种类齐全的各种基因knockdown稳定细胞系。
安必奇生物科技提供的knockdown基因敲低细胞系服务不受基因位点、细胞种类的限制，可以在任何基因、任何位点、各种哺乳细胞上实现基因敲低。我们最终会提供给客户高质、稳定的细胞系以及全面的检测报告，包括mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平检测报告。

技术流程服务内容

• 筛选有效的shRNA- 针对靶基因设计和筛选作用高效的shRNA。
• shRNA表达载体构建- 将shRNA克隆入慢病毒载体。
• 细胞转导和克隆筛选- 由慢病毒介导的shRNA表达载体，可以感染各种细胞，甚至是难转染的细胞。我们已经在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、CHO、HepG2 等多个种属细胞中成功构建了knockdown的稳定细胞系。
• 鉴定- 全面可靠的检测报告，如qRT-PCR 、 Western blot 等检测报告。

我们的优势

• 无基因序列、细胞、物种限制，几乎可敲低任意基因。
• 实验设计简单准确、实验周期短、成本低。
• 毒性低、脱靶情况少；成功率很高。
• 可识别任意目标基因序列，且不受上下游序列影响。
• lentivirus－shRNA经过慢病毒包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。