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cDNA文库构建
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安必奇
安必奇采用SMART cDNA文库构建方法,将mRNA在体外反转录成cDNA,与适当质粒载体连接后转化受体菌,进行繁殖扩增。最终获得包含组织或细胞全部mRNA信息的cDNA克隆群体。到目前为止,安必奇已经具有众多SMART cDNA文库构建的成功案例,能够构建各种材料来源的cDNA文库。我们先进的技术平台和经验丰富的专家会为您提供快速可靠的cDNA文库构建服务,并提供全面的检测报告,包括库容量、插入片段平均长度、重组效率及cDNA完整性等评价。
技术流程
我们的优势
- 样本用量少- 一个样本文库的构建只需要1 μg总RNA。
- 全长比率高- 采用SMART cDNA文库构建专利技术,全长比率在30%以上。
- 库容量大- 我们的专家能够为您提供文库质量标准为 ≥1.0×106的高质量服务。
- 经验丰富- 安必奇经验丰富、专业精湛的专家团队为您提供可靠的实验方案。
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文献和实验,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。 cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。 原理 经典cDNA文库构建的基本原理:用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA 加上适当的连接
by annealing the mRNA to oligo-dT loaded magnetic beads which will greatly facilitate the subsequent recovery of the cDNA products. In either case the next step is a reverse transcriptase treatment which gives rise to a socalled DNA/RNA hybrid. 5. Oligo dG
cDNA文库构建的过程分为六个阶段: 阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链 阶段2:cDNA第二链的合成 阶段3:cDNA的甲基化 阶段4:接头或衔接子的连接 阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDN 阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接 阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链 1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂
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