蛋白翻译后修饰位点鉴定服务

蛋白质翻译后修饰（Protein post-Translational Modification，PTM）在生命体中具有十分重要的作用，与基因表达、信号传导通路、细胞分裂等进程密切相关。同一蛋白在不同生理状态、不同亚细胞定位、不同氨基酸位点的修饰，可能对应不同的功能。因此蛋白质翻译后修饰是当前的一个研究热点和难点。

蛋白质翻译后修饰是以纯化或者复杂的蛋白质样本为研究对象，尽可能对样本中发生修饰的蛋白质进行准确的定性分析。一般常见的修饰类型主要有磷酸化、甲基化、乙酰化、生物素化、磷酸化、糖基化、泛素化、二硫键等多种翻译后修饰类型。同时，我们也可以根据客户需要提供定制化服务。

技术原理

蛋白质氨基酸序列的特定位置可以与化学基团或者小分子量的蛋白共价结合从而发生蛋白质翻译后修饰(post-translational modifications，PTMs)，相较于没有发生修饰的蛋白，PTMs 会导致特定序列分子量的增加，通过高精度的质谱检测就可以检测到特定的蛋白翻译后修饰。质谱可以分辨蛋白质修饰前和修饰后分子量上的变化，因此只要我们知道靶蛋白翻译后修饰前后分子量的精确变化,我们就能帮助您对任何翻译后修饰方式进行鉴定和定量。

技术流程技术特点

• 与传统方法比较，没有放射性的危险；
• 灵敏度高，准确度高。

样本要求

• SDS-PAGE胶条：银染、考染条带可见；
• 蛋白质溶液：蛋白质总量>5μg，浓度>0.1μg/μl。

技术平台
Thermo Scientific Q Exactive
案例解析
同源异型框蛋白 Msx1 的两个新的磷酸化位点的鉴定

同源异型框蛋白Msx1的同系物Msx2中已鉴定出磷酸化修饰位点，并且发挥着重要的生物学功能。但是对Msx1的磷酸化修饰情况还不清楚。为了对Msx1的磷酸化修饰情况进行研究，利用生物信息学的方法对Msx1的磷酸化修饰位点进行预测，进一步利用免疫沉淀和质谱技术对其进行具体实验验证。C2C12细胞中的Msx1蛋白复合物经胰蛋白酶消化后，通过液相色谱和质谱技术进行分离和分析。结果发现两个新的磷酸化修饰位点，分别是152 位的丝氨酸和160位的丝氨酸，而且两个磷酸化位点在人和小鼠中是高度保守的。进一步制备针对这两个磷酸化位点的特异性磷酸化抗体。磷酸化位点的鉴定以及特异性抗体的获得为进一步研究 Msx1 的生物学功能提供了良好的条件。