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- 2026年01月12日
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安必奇
对于较纯或者单一的蛋白样品，我们采用MALDI-TOF蛋白鉴定技术进行蛋白鉴定。除银染的蛋白质胶带样品之外，我们保证对每一个可见的蛋白质胶带的成功鉴定，没有成功的鉴定完全免费。
技术原理基质辅助激光解吸附质谱技术（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time Of Flight ）的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而检测离子。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。
MALDI-TOF质谱原理示意图技术流程
技术特点
- 适合较纯的样品，样品简单，容易检测；
- 目标性强，速度快，通量高。
- 双向凝胶胶点：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见；
- SDS-PAGE胶条：考染、银染（质谱兼容）条带清晰可见，单一蛋白质，纯度>90% ；
- 蛋白质溶液：单一蛋白质，纯度>90%。
ABI 4800 MALDI-TOF/TOF
案例解析
高糖通过不同途径干扰胰岛素分泌细胞功能的蛋白质组学研究
慢性高血糖会导致β细胞的功能紊乱并诱导其加速灭亡，是2性糖尿病的一个主要指标。本研究以INS-IE细胞以及其在25mM葡萄糖处理下的两组细胞为研究对象，通过双向电泳（2D）实验寻找到100个显著性差异表达蛋白质。通过MALDI-TOF对这些差异蛋白质点进行鉴定后发现，高糖组是通过伴侣蛋白、蛋白质合成以及遍在蛋白等途径来扰乱细胞的正常生理功能，这些发现通过后续的功能检测试验得到验证。
参考文献- Bahr U, Deppe A, Karas M, et al. Mass spectrometry of synthetic polymers by UV-matrix-assisted laser desorption/ionization[J]. Analytical chemistry, 1992, 64(22): 2866-2869.
- M Maris et al. High Glucose Induces Dysfunction in Insulin Secretory Cells by Different Pathways: A ProteomicApproach. J. Proteome Res., 2010, 9 (12), pp 6274–6287.
- Fenselau C. Peer Reviewed: MALDI MS and Strategies for Protein Analysis[J]. Analytical chemistry, 1997, 69(21): 661A-665A.
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文献和实验在辛辛苦苦进行了表达和纯化目的蛋白后，我们不免会面临另一个问题：如何储存纯化后的蛋白呢？如果不加注意，就会有前功尽弃的可能。 首先，储存方法的选择取决于蛋白质的稳定性，以及后续实验使用蛋白质的时间和用途。储存时需要避免接近蛋白质稳定极限的储存条件（例如极端 pH 或者接近蛋白质等电点的 pH）。 其次，避免添加会干扰后续实验的成分。 保存方法 1. 短期保存（24 小时内） 大多数的蛋白质可以保存在 4°C。 2. 在 4°C 超过 24 小时 需要考虑对蛋白样品灭菌过滤（使用
蛋白质翻译后修饰 (Protein translational modifications，PTMs) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解，几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。因此，识别和理解 PTM 在细胞生物学和疾病治疗和预防的研究中至关重要。 看到一篇 Thermo Fisher的文章，关于翻译后修饰Post
本节课包含了泛素化与蛋白质表达之间的关联分析、基于蛋白和修饰组学的癌症分子分型分析等知识点。
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