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- LC-MS/MS修饰位点鉴定-技术原理 通过IP、亲和纯化或SDS-PAGE等方法分离纯化得到目的蛋白，将目的蛋白进行酶解和液质联用(LC-MS/MS)检测，通过数据库检索得到设定好的修饰类型在目的蛋白上的的修饰位点。
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- 2026年01月21日
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辉骏生物
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LC-MS/MS修饰位点鉴定—服务到投稿 / 经验丰富 / 价格低—辉骏生物
通过液质联用技术(LC-MS/MS)结合数据库检索，可以对目前已知的各种蛋白修饰类型（如磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化、琥珀酰化等）和一些小分子药物在蛋白上的修饰位点进行鉴定。
LC-MS/MS修饰位点鉴定-技术原理
通过IP、亲和纯化或SDS-PAGE等方法分离纯化得到目的蛋白，将目的蛋白进行酶解和液质联用(LC-MS/MS)检测，通过数据库检索得到设定好的修饰类型在目的蛋白上的的修饰位点。
技术流程
辉骏生物技术优势
1.不需要对修饰进行富集，可同时检测多种修饰类型；
2. 项目周期短。
LC-MS/MS修饰位点鉴定技术-应用范围
★单一蛋白或低复杂程度蛋白样本的修饰鉴定；
★已知分子量的小分子药物与蛋白结合的修饰位点鉴定。
LC-MS/MS蛋白修饰位点鉴定实验—辉骏生物客户文献
| 2. Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in humancolorectal cancer. Nature Communications (2019，IF = 12.121). |
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文献和实验蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。 组蛋白翻译后修饰多发生在组蛋白的 N-端尾部，包括甲基化、乙酰化、磷酸化、ADP-核糖基化、泛素化和小分子泛素化修饰，这些修饰有助于其他蛋白质与 DNA 的结合，从而产生协同或者拮抗作用来调控基因转录。例如，乙酰化使组蛋白尾部正电荷减少，从而削弱了与带负电荷 DNA 骨架的作用，而促进染色质呈开放状态, 甲基化激活或抑制基因功能主要依赖于修饰的位点，主要与赖氨酸残基的单甲基化、双甲基化或三甲基化有关。 组蛋白修饰最基本
或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
1. 前言 蛋白质翻译后磷酸化修饰是影响真核细胞每一个细胞内活动过程的最丰富的细胞调节形式。一个蛋白质的磷酸化能引起结构、稳定性、酶活，与其他分子之间相互作用的能力或其亚细胞定位的改变。蛋白激酶催化可逆的蛋白质底物的磷酸化，作用在其丝氨 酸、苏氨酸和酪氨酸残基位点上。如在拟南芥中，丝氨酸/苏氨酸激酶占整个蛋白质组 的 4% [1] ，但对它们的生物学功能还不十分了解。因此，我们需要能开展蛋白激酶全球分析的高通量蛋白质组学方法[ 2，3] 来鉴定下游底物。 用于确定磷酸化共有位点
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