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辉骏生物
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LC-MS/MS修饰位点鉴定—服务到投稿 / 经验丰富 / 价格低—辉骏生物
通过液质联用技术(LC-MS/MS)结合数据库检索,可以对目前已知的各种蛋白修饰类型(如磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化、琥珀酰化等)和一些小分子药物在蛋白上的修饰位点进行鉴定。
LC-MS/MS修饰位点鉴定-技术原理
通过IP、亲和纯化或SDS-PAGE等方法分离纯化得到目的蛋白,将目的蛋白进行酶解和液质联用(LC-MS/MS)检测,通过数据库检索得到设定好的修饰类型在目的蛋白上的的修饰位点。
技术流程
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辉骏生物技术优势
1.不需要对修饰进行富集,可同时检测多种修饰类型;
2. 项目周期短。
LC-MS/MS修饰位点鉴定技术-应用范围
★单一蛋白或低复杂程度蛋白样本的修饰鉴定;
★已知分子量的小分子药物与蛋白结合的修饰位点鉴定。
LC-MS/MS蛋白修饰位点鉴定实验—辉骏生物客户文献
| 2. Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in humancolorectal cancer. Nature Communications (2019,IF = 12.121). |
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★ LC-MS/MS蛋白鉴定

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文献和实验蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。 组蛋白翻译后修饰多发生在组蛋白的 N-端尾部,包括甲基化、乙酰化、磷酸化、ADP-核糖基化、泛素化和小分子泛素化修饰,这些修饰有助于其他蛋白质与 DNA 的结合,从而产生协同或者拮抗作用来调控基因转录。例如,乙酰化使组蛋白尾部正电荷减少,从而削弱了与带负电荷 DNA 骨架的作用,而促进染色质呈开放状态, 甲基化激活或抑制基因功能主要依赖于修饰的位点,主要与赖氨酸残基的单甲基化、双甲基化或三甲基化有关。 组蛋白修饰最基本
或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
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