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文献和实验【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol
的上下游序列, 设计合适的引物,并从提取的基因组中扩出目的片段,然后选择部分阳性克隆进行PCR产物或做T载克隆送测序进行最终确认。目前推崇的各种识别错配碱基的酶切鉴定方法及Surveyor assay试剂盒由于假阳性过高及过于昂贵,一般实验室我们不建议使用。少数试剂酶公司对于酶的推荐有利益因素驱动,希望各位战友注意甄别,土豪请忽略。(*^__^*) 运用CRISPER-Cas9技术进行癌细胞系的基因敲除,我们的经验是若设计的CRISPER-Cas9载体表达水平够高,敲除效率够高,此步骤多数时候可以直接
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如尿嘧啶核苷及胸腺嘧啶核苷,用于细菌及哺乳动物细胞培养时的核酸标记。核苷三磷酸中以a型的NTP及dNTP为最常用。此处N代表A、G、C、U或T四种碱基。用于核酸的标记,如缺口翻译标记。也可用于染色体原位杂交或电镜核酸分析等。 35 S标记的氨基酸最常用的是蛋氨酸,用途同 14 C标记。[α- 35 S]dNTP中的α位磷酸基中的氧用硫取代,得到的核苷三磷酸,可用于核苷酸序列分析,也可用于缺口翻译法标记DNA。 32 P常用标记
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