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上海仁科生物科技有限公司
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10x Genomics Chromium 系统全面出击,提供基因组、转录组、免疫组、表观组解决方案。
Chromium系统可在几分钟之内将样本封装到数百至数万个微反应体系,每个微反应体系中含有可唯一识别的编码DNA用于后续数据拆分及分析。
每个凝胶珠(Gel Bead),注入数百万独特的寡核苷酸序列,与样品混合,样品可以是高分子量(HMW)DNA,单个细胞,使用特征编码技术(Feature Barcoding Technology)标记的细胞,用转座酶处理的细胞核,或细胞珠(Cell Beads)。接下来凝胶珠和样品被油-表面活性剂溶液包裹,形成GEMs,其作为单独的反应囊泡,随后凝胶珠溶解并且样品被编码DNA所标记(如图1)。然后将每个液滴中含有10x barcode信息的产物混合,构建标准测序文库。待测序后,根据10x barcode序列进行HMW DNA,单细胞,单细胞核数据拆分,并利用10x Genomics提供的可特异性解析10x barcode的分析软件进行数据分析及可视化展示。
特点/优势
该系统每次运行提供8个通道,每个通道可以收集100-10000个细胞;
针对不同应用,每次细胞分装运行时间从4.5min-20min不等;
细胞捕获效率可高达65%;
测序结果中 doublet比例为0.9%/1000个细胞;
提供至少300万种序列标签,确保每个细胞均可获得唯一的标记;
针对V(D)J分析,可检出单个细胞的配对的TCR/BCR双链V(D)J全长序列;
针对单细胞CNV分析,单细胞CNV事件检出分辨率为2Mb,细胞亚群CNV事件分辨率可达百Kb级别;
针对单细胞ATAC分析,线粒体污染率低于2%;
提供试剂,设备及分析软件的完整解决方案;
*该系统可以提供基于Linked-Reads技术的长片段测序文库;
* 提供大于100万个独立反应体系;
*提供大于400万种标签序列,确保每个液体体系均可以获得唯一的标记;
*提供包含试剂,设备及分析软件Supernova,Long Ranger和Loupe Genome Browser的完整解决方案。
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文献和实验随着单细胞测序技术的不断发展,研究者除了可以对单个细胞的多个组学层面进行信息挖掘外,也可利用自动化平台来完成细胞图谱的绘制,实现大量细胞的分群。10x Genomics Chromium™ 平台从 2018 年初开始,利用该平台研究单细胞转录组就已发表 30 余篇文章,囊括了 CNS 等各大刊。可谓是自动化完成大规模单细胞研究的一项黑科技。2018 年 10x Genomics 平台部分高分文章■ 技术原理 10x Genomics Chromium™ 平台利用微流控技术进行单个
我们在学习westgard质控规则时,对于“10X”规则会看到类似于这样的描述:“1个水平的质控连续10次结果落在平均值(靶值线)的一侧或2个水平的质控同时各有连续5次的结果落在平均值(靶值线)的一侧,就判断为失控,该规则提示存在系统误差”。通过以上对10X描述的理解,我们就会很自然地将图1中的质控数据判定为失控: 图1 那我们再看一组在控的质控数据,如图2:
等方面的特性和差异。异质性存在于生殖细胞、胚胎细胞、神经细胞、免疫细胞、干细胞、肿瘤细胞等细胞中,这一特征使得单细胞测序研究具有重要意义,所谓的单细胞测序(single cell sequencing,SCS)是指对单个细胞进行 DNA 或 RNA 测序,在此我们主要介绍 10x Genomics Chromium™ 平台单细胞 3’端转录组测序的研究应用。10x 单细胞转录组的技术优势10x Genomics 的技术核心是利用微流控芯片对细胞进行精确区分,保证每个小反应体系(Gel Bead
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