柠檬酸钠-EDTA抗原修复液（40×）

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

一、SP 法 1）脱蜡、水化；2）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；3）3% H2O2（80% 甲醇）滴加在 TMA 上，室温静置 10 分钟；4）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；5）抗原修复；6）PBS 洗 2～3 次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗 50μl，室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9）4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10）PBS 洗 3 次各 5 分钟；11）滴加 Ⅱ 抗 40～50 μl，室温

TSA多重免疫荧光染色的实验步骤

实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原修复液

免疫组化实验染色效果差？原来你一直忽略的是它!

水质对免疫组化染色结果的影响显著: 在免疫组化染色过程中，实验用水一般用来配制两种试剂: 01 抗原修复液 包括柠檬酸(pH6.0) 、EGTA(pH 9.0) 和EDTA(pH9.0) 等种类，主要用于抗原修复。在免疫组化染色前，必须进行抗原修复，使抗原决定簇充分暴露，以便完全彻底地与抗体结合。未进行抗原修复的抗体即使阳性，其阳性细胞数量及染色强度要明显比进行过抗原修复的少、弱。电导率高的水因杂质存在容易影响溶液pH值，pH值或高或低都会造成抗原修复不佳，抗原决定簇不能完全彻底暴露