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- 2025年07月08日
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274
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北京百奥莱博科技有限公司
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4ml|10ml
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文献和实验WB 是实验室常见实验之一，蛋白定量后，上样之前，还需要哪些步骤制样呢？1. 蛋白含量测定后，Invent 建议大家把各个样品稀释到某一固定浓度（稀释可使用 PBS，水或裂解液），等体积等质量上样，计算上样体积时需包含 loading buffer 的体积。例如：把所有蛋白浓度都稀释到 2ug/ul，然后与 2Xloading buffer 1:1 混合后，浓度成为 1ug/ul，建议上样 20-30ul 即可。2. 与 loading buffer 混匀后，要将样品在沸水中煮 3-5 分钟
问：新买了GelRed，比较贵，打算用节约的方法来使用，也就是把GelRed预混在上样缓冲液里，和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友： 1 假定使用6X上样缓冲液，应该以多大比例混合GelRed？ 2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后，需要孵育一段时间还是可以直接上样？ 3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定，是否可以长期存放，以及存放条件是室温，4度
基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
MALDI-TOF-MS最初用于等分试样（1μL或更少）样品的质谱鉴定，用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定，往往使用Edman降解法测序或ESI-MS，如四极（Q）-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因，主要是因为MALDI技术进行分析，上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度，并且还限制了可以分析的肽浓度，因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重要。MALDI技术通常将等体积的样品和MALDI基质溶液混合，将肽混合
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