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文献和实验WB 是实验室常见实验之一，蛋白定量后，上样之前，还需要哪些步骤制样呢？1. 蛋白含量测定后，Invent 建议大家把各个样品稀释到某一固定浓度（稀释可使用 PBS，水或裂解液），等体积等质量上样，计算上样体积时需包含 loading buffer 的体积。例如：把所有蛋白浓度都稀释到 2ug/ul，然后与 2Xloading buffer 1:1 混合后，浓度成为 1ug/ul，建议上样 20-30ul 即可。2. 与 loading buffer 混匀后，要将样品在沸水中煮 3-5 分钟
问：新买了GelRed，比较贵，打算用节约的方法来使用，也就是把GelRed预混在上样缓冲液里，和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友： 1 假定使用6X上样缓冲液，应该以多大比例混合GelRed？ 2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后，需要孵育一段时间还是可以直接上样？ 3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定，是否可以长期存放，以及存放条件是室温，4度
，同时阴性对照保持干净。 Step 4｜加入SDS上样缓冲液终止反应 反应结束后立即加入SDS-PAGE上样缓冲液。 使用3× Sample Buffer时，可以按40 μL反应液＋20 μL 3×上样缓冲液处理，混匀后于95～100℃加热2～5 min，终止激酶反应并完成蛋白变性。 随后短暂离心，进入SDS-PAGE和Western blot。 Step 5｜先看磷酸化，再看总底物 有明确磷酸化位点抗体时，优先检测对应的p-Substrate。 同一批样本还要检测Total substrate
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