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- 经科
- 上海
- JK-097-1
- 2025年12月10日
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1年
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- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
200ml
适用范围：外周血或者组织裂解液中的单个核细胞的分离；如外周血淋巴细胞的分离、脐血造血干细胞的分离、脂肪间充质干细胞的分离等等；
作用机理：密度梯度沉降法是根据细胞密度差异，借助细胞分离液和离心，进行细胞分离纯化的常用方法之一。样本密度分离液产生一定程度的密度梯度，将稀释后的全血铺层于分离液之上。离心后，红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。
产品优势：
1、原料严格质控
用 途: 通过密度分离作用，用于样本中淋巴细胞的分离，以便于对淋巴细胞的进一步分析。
主要组分: 聚蔗糖、泛影葡胺等。
检验方法:
1、取新鲜抗凝全血，EDTA（枸橼酸钠或肝素）抗凝剂均可。
2、用等体积PBS或0.9%NaCl稀释全血。
3、在离心管中加入抗凝未经稀释等体积的分离液，将稀释后的血样缓慢加至分离液面上，保持两页面清晰。分离液、抗凝未经稀释全血、PBS（或生理盐水）体积比1:1:1。
4、室温，水平转子700-800g（2000-2500rpm）离心20min。
5、离心结束后，管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆/组织匀浆层，血浆层与分离液层之间是一层薄较致密的白膜，即：单个核细胞（包括淋巴细胞和单核细胞）层。
6、小心吸取白膜层到另一离心管中。
7、用PBS或RPMI 1640稀释到一定体积，颠倒混匀。室温，水平转子250g（1000rpm）离心10min，弃上清。
8、重复洗涤1-2次。
9、用PBS或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。
实验要求：样本、分离液及分离环境温度为20±5℃。
保存条件：常温避光保存（或4℃冰箱）。
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文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
。 Percoll浓度(％) 70 60 50 40 30 20 比重g／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031 2. 不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液
液界 liquid junction 指二种浓度或不同组成的电解质的接触面。液界可简单地把比重轻的溶液由重叠在重液之上而形成，但随着时间的进行，由于扩散或对流等可多少出现液体的混合。为防止混合可采取放置多孔质的膜以延缓扩散，或不断流动液体更新液界等方法。在液界上可产生液界电位（ liquid junction potential， EL ）。比较简单的是在浓度不同的同一种一价的电解质溶液间或浓度相同并且具有共同的离子的不同的电解质溶液间的情况下，液界电位的大小与液界的混合
试剂 1. 小牛血清 2. Percoll细胞分离液 3. 8.5％NaCl 4. 1.5MPBS 实验设备 1. 高速冷冻离心机(3K-30) 2. 4℃、-20℃冰箱 3. 长针头注射器 4. 1.5mL和10mL离心管 实验材料 PBMC细胞 实验步骤 1. 不同
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