血液RNA柱式提取试剂盒

本试剂盒是在血液RNA提取试剂盒基础上开发的柱式升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。

试剂盒特点：

• 比BTN3071更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。


• 产量和纯度更高，OD260/280均在2.0左右，产率一般为2～5μg/mL人血。


• 每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。


• 与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50mL
溶液B	15mL
溶液C	50mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
RNA洗脱液	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

• 将0.2～1.5mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中。


• 12000～15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。


• 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。


• 将0.3mL的溶液B加入到离心管中，剧烈震荡30秒。


• 和0.2mL氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。


• 12000～15000g室温离心3～5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5～0.9mL)转移到另一干净离心管中。
  注意：转移的液体不要超过0.7mL，否则下一步不能加入等体积的溶液C。为防止污染，最好留100μL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。


• 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。


• 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。


• 加0.7mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。


• 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
  注意：增加此步可以进一步提高RNA的纯度。


• 室温12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。


• 将离心吸附柱转移到一个RNase-free的收集管中，加入50～100μL RNA洗脱液，室温放置1～2分钟。


• 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。


• RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。


• RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2～5μg/mL。


• RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：如何去除RNA样品中的DNA污染？
A：可以使用百奥莱博的非酶DNA清除剂DNA ERASOL-2。
Q：为何有的样品在第6步离心后有很厚的中间层，上清很少。
A：这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
Q：离心吸附柱的RNA最大吸附量是多少？
A：是40μg。