血液RNA提取试剂盒说明书

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应血液RNA提取试剂盒说明书，产品信息：

类别：RNA纯化

英文名：Blood RNA Extraction Kit

产品名	产品编号	包装规格
血液RNA提取试剂盒	BTN3071	50次

编号：BTN3071

规格：50次

产地：国产|进口

英文名：Blood RNA Extraction Kit

本试剂盒是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒，主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNA提取试剂盒，提取纯化后的白细胞RNA可使用动物RNA提取试剂盒)。

 

试剂盒特点：

1. RNA 无明显降解和DNA污染，OD260/280 均在1.9以上。血液RNA的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系，人全血产量为2-6μg/mL，兔全血产量为5-10μg/mL。

2. 操作简单，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十多分钟，可以全在室温下进行。

3.处理量大，每管的样品处理量可以达到1.5mL，高于进口的同类产品。

4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸*，草酸*)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。

 

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

 

储存条件：常温运输，4℃保存，溶液B和溶液C有腐蚀性。4℃保存的溶液A可能会产生白色沉淀，用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。

 

使用方法：

1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中，15000g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1mL以下的微量血液样品最好加入百奥莱博的微量助沉剂RNApp。

2. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。

3. 将0.3mL的溶液B和0.2mL *仿加入离心管，剧烈震荡30秒。

4. 13000-15000g室温离心5分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染，最好留100μl左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。

5. 加入0.5mL的溶液C和0.2mL的*仿到上清液中，用手上下剧烈摇晃30秒。

6. 13000-15000g室温离心3分钟，将上清液(无色，约1mL)转移到另一干净离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200μl的方式分批转移。

7.在上清液中加入1/2 体积的溶液D，用手上下剧烈摇晃30秒，溶液将呈白色浑浊状。

8. 13000-15000g室温离心5-30分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色RNA沉淀。

9.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。室温离心13000-15000g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。

10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。

11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl)，用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。

12.室温短暂放置2分钟，立即加入适量(一般为10-30μl)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Scavenger 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。

 

疑难解答：

1．有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层，上清很少。原因是蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。

2．有的样品在加入溶液D离心后，沉淀上浮在液面，这是由于液体的比重大于沉淀，可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低，直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了，如果这样需要重做。

3．千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则将变得十分难溶。

4．无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时，一定要使用RNA变性/上样液(如百奥莱博的RNAload)以让RNA 充分变性，否则加样孔中会有RNA复合物(人们会误以为是DNA污染)。使用没有变性能力的DNA上样液不能使RNA 复合物分离。

5．测OD时一定要使用pH8.0的缓冲液(如TE)，不要使用微酸性的DEPC水，否则OD 值会比真实的值低15-20%。

血液RNA提取试剂盒说明书专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
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BTN3160	工具酶	RNase A溶液(10mg/mL)
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BTN130957	核酸扩增(PCR)	免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)
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BTN100940	核酸扩增(PCR)	石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒

 

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