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- 2025年10月24日
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文献和实验【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法
有多少种不同稀释浓度。通常，一种或两种一抗的稀 释度是用两种或三种不同的二抗稀释度进行测定的。例如：1/1000 的一抗和1/50000 的二抗；1/1000 的一抗和1/100000 的二抗；1/5000 的一抗和1/50000 的二抗；以及1/5000 和1/100000 的二抗。 3. 将膜放在滤纸上。将抗原稀释液点在膜上。用尽可能小量的稀释液点在膜上（2-5 ul 为宜），因为用的体积越大，信号越弥散。抗原溶液在膜上干10-30 分钟或直至无可见的水分。 4. 用含0.05
重要。1.转膜时间2. 转膜过程环境温度3. 转膜缓冲液使用次数4．转膜缓冲液中甲醇比例（v/v）（三）一抗使用*使用IRS1（150kDa）、pPERK（125kDa）和内质网应激XBP1（29/55kDa）抗体等检测小鼠肝组织探讨一抗在多种条件下对结果影响（IRS1，pPERK和 XBP1 用于 WB 检测难以出现清晰条带，因此选择合适的一抗及孵育条件就很关键）。1.一抗稀释溶剂2.一抗稀释比例3.一抗孵育时间（四）二抗使用*高浓度的二抗会导致大量非特异性结合，造成WB背景较深。1.二抗稀释比例 （洗释
使用寿命（抗体并非绝对不可以冻融；只是高浓度的原始管抗体的冻融对效价会有较大影响）。抗体稀释液（一抗、二抗稀释液也可同也可不同）和封闭液可以相同，可以不同，因为抗体稀释液可以采用复方的，所以即使混合了少许，不会对抗体的使用产生较大的影响。不过封闭液用milk时，gelatin稀释的一抗混入少许milk会影响其使用寿命。由于以上诸多可变因素，实在无法总结出一种万金油式的抗体稀释液（只能是多数通用），因此对待具体问题时，请具体对待（多花点心思摸索吧）。
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